КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Номер 14-25-00129

НазваниеРазработка новейших подходов для изучения механизмов действия противоопухолевых препаратов и раннего ответа опухоли на лечение на основе оптических и молекулярных технологий

РуководительЛукьянов Константин Анатольевич, Доктор биологических наук

Организация финансирования, регион федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Приволжский исследовательский медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, Нижегородская обл

Период выполнения при поддержке РНФ

2014 г. - 2016 г.

, продлен на 2017 - 2018. Карточка проекта продления (ссылка)

Конкурс№2 - Конкурс 2014 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований коллективами существующих научных лабораторий (кафедр)».

Область знания, основной код классификатора 05 - Фундаментальные исследования для медицины, 05-101 - Экспериментальная медицина

Ключевые словапротивоопухолевые препараты, механизмы действия, ранний ответ опухоли на лечение, микроскопия сверхвысокого разрешения, флуоресцентная многофотонная микроскопия с временным разрешением, флуоресцентный имиджинг, ОКТ, генетически-кодируемый сенсор, культуры клеток, опухолевые сфероиды, опухолевая модель

Код ГРНТИ76.03.00

СтатусУспешно завершен

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Аннотация
В проекте предлагается разработка ряда новых уникальных инструментов на основе генетически кодируемых маркеров и сенсоров и оптического биоимиджинга для изучения механизмов действия противоопухолевых препаратов и оценки раннего ответа опухоли на лечение. Актуальность выполнения проекта обусловлена, в первую очередь, следующими фактами. Во-первых, точные механизмы действия некоторых противоопухолевых химиопрепаратов, уже применяемых в клинике, не до конца изучены. Во-вторых, ведется разработка препаратов, направленных не на прямое нарушение клеточного деления, а на метаболизм опухолевой клетки. В-третьих, не развиты подходы к оценке раннего ответа опухоли на лечение, актуален поиск критериев структурного или функционального характера, отражающих реакцию опухоли на терапию до появления признаков опухолевой регрессии. Задачами проекта будут: 1. Анализ митотической активности живых опухолевых клеток с помощью сенсора FUCCI на основе двух флуоресцентных белков. Будет создан новый сенсор клеточного цикла FLIM-FUCCI на основе сенсора FUCCI, включающий флуоресцентные белки с отличающимися временами жизни флуоресценции. Будет получена стабильная линия опухолевых клеток, экспрессирующий данный сенсор. Впервые будут проанализировано влияние противоопухолевого препарата на распределение фаз клеточного цикла в системах in vitro. Будет разработана методика визуализации сигнала сенсора FLIM-FUCCI в экспериментальной опухоли мышей на основе мультифотонной флуоресцентной микроскопии с функцией FLIM. 2. Анализ нонсенс-опосредованной деградации мРНК в живых опухолевых клетках с помощью репортерных систем на основе флуоресцентных белков. Впервые будет исследована активация каскада нонсенс-опосредованной деградации мРНК (NMD) в опухолевых клетках в ответ на действие химиопрепарата. Для этого будет создана стабильная линия опухолевых клеток, экспрессирующая двухцветный сенсор NMD. Будут разработаны методики in vitro и in vivo визуализации пространственно-временных паттернов активности NMD-каскада в опухолевых клетках. 3. Оценка апоптоза в опухолевых клетках in vitro и опухолях животных с помощью генетически кодируемых сенсоров активности каспазы-3. Будет разработана методика регистрации FRET-сигнала генетически кодируемого сенсора каспазы-3 по соотношению дальне-красной и инфра-красной флуоресценции каспазного сенсора в опухолях животных in vivo на основе флуоресцентного молекулярного имиджинга или по времени жизни флуоресценции донора (FLIM). 4. Анализ внутриклеточного водородного показателя рН в опухолевых клетках с помощью рациометрического генетически кодируемого сенсора. Будут разработаны методики оценки уровня внутриклеточного рН в опухолевых клетках в культуре и опухолях животных с помощью генетически кодируемого рациометрического сенсора. Впервые с помощью генетически кодируемого сенсора рН будет проанализировано изменение внутриклеточного рН в ответ на противоопухолевую терапию. 5. Анализ эндогенных метаболических кофакторов НАДН и ФАД в опухолевых клетках по интенсивности и/или времени жизни их флуоресценции. Впервые будет исследовано изменение интенсивности и/или времени жизни флуоресценции метаболических кофакторов НАДН и ФАД в опухолевых клетках под действием химиопрепаратов. Для этого будут разработаны методики визуализации метаболических кофакторов дыхательной цепи в опухолевых клетках in vitro и опухолевой ткани животных методом двухфотонной флуоресцентной микроскопии с временным разрешением. 6. Анализ ультраструктуры цитоскелета опухолевых клеток с помощью высокоразрешающей микроскопии PALM/STORM и флуоресцентных репортеров. Будет создана линия опухолевых клеток, стабильно меченная фотопереключаемым флуоресцентным белком, слитым с белком цитоскелета, для наблюдения ультаструктурной организации цитоскелета методом PALM/STORM. Впервые с применением микроскопии сверхвысокого разрешения и оригинальной методики, разработанной авторами заявки, будет исследовано состояние цитоскелета опухолевых под действием противоопухолевого препарата. 7. Разработка генетически кодируемой метки для ОКТ на основе рефлектина и силикатеина. Впервые в качестве генетически кодируемого контрастного агента для ОКТ будут апробированы белки рефлектин и силикатеин, формирующие в клетках светорассеивающие частицы. Будет впервые определена их функциональная активность и субстратная специфичность, а также способность к формированию светорассеивающих частиц в клетках бактерий и млекопитающих. В результате, с помощью новых инструментов будет проанализирован ответ опухолевых клеток на лечение химиопрепаратами в монослойных культурах, опухолевых сфероидах и опухолях животных. На основе полученных структурных (цитоскелет) или функциональных изменений (активация каспазы-3, активация NMD-каскада, митотическая активность, внутриклеточный pH, уровень метаболических кофакторов НАДН и ФАД) будут сделаны предположения о механизмах действия исследуемых препаратов.

Ожидаемые результаты
В ходе выполнения проекта будут получены следующие результаты: 1. Генетические конструкции для экспрессии новых вариантов сенсора (FLIM-FUCCI) в раковых клетках (2014 г). Результаты сравнительного тестирования сенсоров FLIM-FUCСI в культурах раковых клеток, отбор вариантов FLIM-FUCCI с максимальной яркостью и хорошо разделяемым сигналом по времени жизни флуоресценции (2014 г). Стабильная клеточная линия опухоли, экспрессирующая вариант FLIM-FUCCI с наилучшими характеристиками (2015 г). Методика визуализации сигнала сенсора FLIM-FUCCI в экспериментальной опухоли мышей на основе мультифотонной флуоресцентной микроскопии с функцией FLIM (2016 г). 2. Стабильная линия опухолевых клеток, экспрессирующая двухцветный сенсор нонсенс-опосредованной деградации мРНК NMD (2014 г). Методики in vitro (2015 г) и in vivo визуализации пространственно-временных паттернов активности NMD-каскада в опухолевых клетках (2016 г). 3. Методика детекции FRET-сигнала по соотношению дальне-красной и инфра-красной флуоресценции каспазного сенсора в опухолях животных in vivo на основе флуоресцентного молекулярного имиджинга (2014 г). или по времени жизни флуоресценции донора (FLIM) (2015 г). 4. Методики оценки уровня внутриклеточного рН в опухолевых клетках в культуре (2014 г). и опухолях животных (2015 г). с помощью генетически кодируемого рациометрического сенсора. 5. Методики визуализации метаболических кофакторов дыхательной цепи в опухолевых клетках in vitro (2014 г). и опухолевой ткани животных (2015 г). методом двухфотонной флуоресцентной микроскопии с временным разрешением; 6. Методика оценки цитоскелета опухолевых клеток in vitro с использованием STORM микроскопии и уникальных контрастных агентов – флуоресцентных белков (2014 г). Линия опухолевых клеток, стабильно меченная фотопереключаемым флуоресцентным белком, слитым с белком цитоскелета (актин), для наблюдения ультаструктурной организации цитоскелета методом PALM/STORM (2015 г). Методика визуализации срезов опухоли, меченной флуоресцентным репортером с применением технологии PALM/STORM микроскопии (2016 г.). 7. Генетические конструкции для гетерологической экспрессии рефлектина и силикатеина в клетках млекопитающих и бактерий (2014 г). Результаты определения функциональной активности и субстратной специфичности белков (2014-2015 г). Данные световой и электронной микроскопии о способности рефлектина и силикатеина к формированию светорассеивающих частиц в клетках (2015 г). Результаты исследования рефлектина и силикатеина как контрастных агентов для ОКТ опухолевой ткани (2016 г). 8. Результаты анализа ответа опухолевых клеток на лечение химиопрепаратами в монослойных культурах (2015-2016 гг), опухолевых сфероидах (2015-2016 гг) и опухолях животных (2016 г) по структурным (цитоскелет) или функциональным изменениям (активация каспазы-3, активация NMD-каскада, митотическая активность, внутриклеточный pH, уровень метаболических кофакторов НАДН и ФАД). Выполнение данного проекта позволит приблизиться к пониманию механизмов действия противоопухолевых препаратов и выработать подходы к оценке раннего ответа опухоли на противоопухолевое воздействие с использованием новейших оптических, генно-инженерных и молекулярных технологий, что несет в себе важное фундаментальное и прикладное значение. Ожидаемые научные результаты отвечают условиям новизны и оригинальности и соответствуют мировому уровню исследований. Полученные клеточные линии и методики анализа ультраструктуры цитоскелета, активности каспазы-3, NMD-каскада, митотической активности, внутриклеточного pH, уровеня метаболических кофакторов могут быть коммерциализированы через патентование. Результаты представляют интерес для научно- исследовательских институтов и образовательных учреждений медико-биологического профиля, а также предприятий фармацевтической и химической отраслей промышленности, лечебных учреждений широкого профиля. Результаты могут быть использованы при проведении фундаментальных НИР, направленных на повышение эффективности лечения онкологических заболеваний. Основные результаты работы могут быть включены в соответствующие разделы спецкурсов и лекций курса по онкологии, фармакологии, биомедицине, биофизике, молекулярной биологии, генной инженерии.

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Аннотация результатов, полученных в 2014 году
Проект направлен на разработку новых методов на основе генетически кодируемых маркеров и сенсоров и оптического биоимиджинга для изучения механизмов действия противоопухолевых препаратов и оценки раннего ответа опухоли на лечение. Работа ведется по нескольким направлениям, по которым в 2014 г были получены следующие основные результаты. 1. Получен новый вариант генетически кодируемого сенсора клеточного цикла, позволяющий вести мониторинг митотической активности раковых клеток с помощью микроскопии времени жизни флуоресценции в красном канале детекции. 2. Генетически кодируемый флуоресцентный сенсор активности каскада нонсенс-опосредованной деградации мРНК (NMD) использован для сравнения активности этого каскада в раковых клеточных линиях HeLa, CТ26 и LLC. Показана высокая активность NMD в клетках HeLa и LLC, и низкая – в клетках CТ26. 3. Разработана методика детекции FRET-сигнала по соотношению дальне-красной и инфра-красной флуоресценции каспазных сенсоров mKate2-DEVD-iRFP и FP650-DEVD-iRFP в опухолях животных CT26 in vivo на основе флуоресцентного молекулярного имиджинга. Продемонстрирована гетерогенность FRET-сигнала в опухоли при неинвазивном наблюдении. 4. Разработана методика оценки уровня внутриклеточного рН в опухолевых клетках HeLa в культуре с помощью генетически кодируемого рациометрического сенсора SypHer2 и методов флуоресцентной микроскопии. Показан однородный рациометрический сигнал, отражающий рН, в цитоплазме клеток. 5. Разработана методика визуализации метаболических кофакторов дыхательной цепи НАДН и ФАД в опухолевых клетках in vitro методом двухфотонной флуоресцентной микроскопии с временным разрешением (FLIM). Показана более высокая интенсивность флуоресценции НАДН, чем ФАД. Установлено, что кривые затухания флуоресценции кофакторов имеют биэкспоненциальный характер с временами жизни 0.542 ± 0.052 нс (τ1) и 2.085 ± 0.107 (τ2) нс для НАДН, 0.296 ± 0.028 нс (τ1) и 1.706 ± 0.091 (τ2) нс для ФАД. 6. Разработан метод получения флуоресцентных изображений сверхвысокого разрешения на основе новой репортерной системы - белкового домена, обратимо связывающего флуорогенный краситель. Новый метод применен для визуализации ультраструктуры цитоскелета раковых клеток на примере актин-связывающего белка актинина в клетках HeLa in vitro. 7. Проведено тестирование силикатеина А1 из губок, экспрессированного в бактериях, в реакциях с искусственными субстратами. Показано, что как по эффективности реакции с силикатеином, так и по удобству использования тетракис(2-гидроксиэтил)ортосиликат (ТГЭОС) превосходит широко используемый в настоящее время тетраэтоксиортосиликат (ТЭОС). Полученные научные результаты отвечают условиям новизны и оригинальности и соответствуют мировому уровню исследований. Все запланированные работы первого этапа выполнены полностью.

Публикации

1. Злобовская О.А., Саркисян К.С., Лукьянов К.А. Инфракрасный флуоресцентный белок iRFP как акцептор для ферстеровского резонансного переноса энергии Биоорганическая химия, Том 41, № 3, с. 299–304 (год публикации - 2014) https://doi.org/10.7868/S0132342315030136

2. Переверзев А.П., Гурская Н.Г., Ермакова Г.В., Кудрявцева Е.И., Маркина Н.М., Котлобай А.А., Лукьянов С.А., Зарайский А.Г., Лукьянов К.А. Method for quantitative analysis of nonsense-mediated mRNA decay at the single cell level Scientific Reports, 5:7729 (год публикации - 2015) https://doi.org/10.1038/srep07729

Аннотация результатов, полученных в 2015 году
1. Получены стабильные клеточные линии, экспрессирующие сенсор клеточного цикла FUCCI на основе двух красных флуоресцентных белков с разным временем жизни флуоресценции. Показано, что с помощью данного сенсора можно визуализировать различные стадии жизненного цикла раковых клеток в одном (красном) канале детекции с помощью микроскопии времени жизни флуоресценции (FLIM). 2. Получены стабильные клеточные линии, экспрессирующие сенсор активности каскада нонсенс-опосредованной деградации мРНК (NMD). Проведена оценка активности NMD в ксенографтной опухоли, которая показала существенное снижение активности этого каскада по мере роста опухоли. 3. Дальне-красные сенсоры активности каспазы-3 протестированы на модельных опухолях в иммунокомпетентных мышах. С использованием методов FLIM и FRET проведен анализ опухолевой ткани на наличие зон апоптоза. 4. С использованием генетически кодируемого сенсора внутриклеточного pH SypHer2 исследован ответ опухолевых клеток на действие различных противоопухолевых препаратов. Показаны колебания уровня pH в клетках ксенографтной опухоли в зависимости от наличия в ней некротических участков. 5. С применением метода FLIM проведен анализ изменений метаболического статуса раковых клеток в ответ на действие различных противоопухолевых препаратов. Разработана методика определения показателей НАДН и ФАД в модельной опухоли на иммунокомпетентных мышах. 6. Создана линия опухолевых клеток, стабильно экспрессирующая репортерную систему, которая позволяет обратимо связывать флуорогенный краситель. С использованием высокоразрешающей локализационной микроскопии показаны ультратонкие изменения в организации белков цитоскелета раковых клеток в ответ на действие различных химических агентов, в том числе противоопухолевого препарата. 7. Предложен новый кремний-содержащий субстрат для силикатеинов, обладающий на порядок меньшей токсичностью для клеток млекопитающих по сравнению с обычно используемыми субстратами. Продемонстрировано образование частиц кремнезема в результате активности силикатеина, экспрессированного в клетках млекопитающих. 8. С помощью новых флуоресцентных сенсоров и методов флуоресцентной микроскопии проведен анализ ответа опухолевых клеток in vitro на воздействие химиопрепаратов (таксол, цисплатин, цитохалазин D) в полулетальной концентрации. Обнаружены как ранние, так и отложенные эффекты, выражающиеся в изменении рН, возникновении окислительного стресса, перестройках актинового цитоскелета. 9. Проведено исследование противоопухолевой эффективности фотодинамической терапии (ФДТ) с фототоксичным белком KillerRed на модели подкожной опухоли иммунокомпетентных мышей. Показано, что ФДТ импульсным, но не непрерывным лазером приводит к существенному торможению роста опухоли. Таким образом, впервые удалось использовать ФДТ, опосредованную экспрессируемым клетками опухоли фотосенсибилизатором, для торможения роста опухоли in vivo. Получен и охарактеризован новый фототоксичный белок KillerOrange. Этот белок проявляет фототоксические свойства при облучении синим (450-495 нм) светом и может быть использован совместно с KillerRed для независимого светоиндуцируемого уничтожения разных клеточных популяций в одной биологической системе.

Публикации

1. K.E. Luker, P. Pata, I.I. Shemiakina, A. Pereverzeva, A.C. Stacer, D.S. Shcherbo, V.Z. Pletnev, M. Skolnaja, K.A. Lukyanov, G.D. Luker, I. Pata, D.M. Chudakov Comparative study reveals better far-red fluorescent protein for whole body imaging Scientific Reports, V. 5, P. 10332 (год публикации - 2015) https://doi.org/10.1038/srep10332

2. Yuzhakova DV, Shirmanova MV, Serebrovskaya EO, Lukyanov KA, Druzhkova IN, Shakhov BE, Lukyanov SA, Zagaynova EV. CT26 murine colon carcinoma expressing the red fluorescent protein KillerRed as a highly immunogenic tumor model. Journal of Biomedical Optics, 20(8):88002 (год публикации - 2015)

3. А. П. Переверзев, М. Е. Матлашов, Д. Б. Староверов, К. А. Лукьянов, Н. Г. Гурская Различия активности нонсенс-опосредованной деградации мРНК в линиях клеток млекопитающих, выявленные с помощью флуоресцентного репортера Биоорганическая химия, Том 41, № 5, с. 587–591 (год публикации - 2015) https://doi.org/10.7868/S0132342315050115

4. Поварова Н.В., Баранов М.С., Ковальчук С.Н., Семилетова И.В., Лукьянов К.А., Кожемяко В.Б. Новый водорастворимый субстрат для силикатеинов. Биоорганическая химия, Том 41, № 3, с. 380–382 (год публикации - 2015)

5. Саркисян К.С., Злобовская О.А., Горбачев Д.А., Божанова Н.Г., Шаронов Г.В., Староверов Д.Б., Егоров Е.С., Рябова А.В., Солнцев К.М., Мишин А.С., Лукьянов К.А. KillerOrange, a genetically encoded photosensitizer activated by blue and green light PLOS One, 10(12): e0145287 (год публикации - 2015) https://doi.org/10.1371/journal.pone.0145287

6. Ширманова М., Южакова Д., Снопова Л., Перельман Г., Серебровская Е., Лукьянов К., Турчин И., Субочев П., Лукьянов С., Каменский В., Загайнова Е. Towards PDT with genetically encoded photosensitizer 1 KillerRed: a comparison of 2 continuous and pulsed laser regimens in an animal tumor model PLOS ONE, 10(12): e0144617 (год публикации - 2015) https://doi.org/10.1371/journal.pone.0144617

7. Мишин А.С., Белоусов В.В., Солнцев К.М., Лукьянов К.А. Novel uses of fluorescent proteins Current Opinion in Chemical Biology, Volume 27, Pages 1–9 (год публикации - 2015)

8. Т.Ф. Сергеева, М.В. Ширманова, Е.В. Загайнова, К.А. Лукьянов Современные методы исследования апоптотической гибели клеток (обзор) Современные технологии в медицине, том 7, номер 3, стр. 172-182 (год публикации - 2015) https://doi.org/10.17691/stm2015.7.3.21

9. Серебровская Е.О., Лукьянов К.А. Chromophore-Assisted Light Inactivation: a powerful tool to study protein functions In: "Singlet Oxygen: Applications in Biosciences and Nanosciences" (Editors S. Nonell, C. Flors), Royal Society of Chemistry, London, UK, Сhapter 35, P. 181-199. (год публикации - 2016)

Аннотация результатов, полученных в 2016 году
1. Оценено изменение митотической активности опухолевых клеток под влиянием противоопухолевых препаратов цисплатин и таксол с помощью сенсора клеточного цикла FUCCI на основе красных флуоресцентных белков mCherry и mKate2. Проведена визуализация пространственных паттернов митотической активности в опухолевой ткани in vivo, в образцах ex vivo и криосрезах опухоли. 2. Оценено изменение активности каскада NMD в опухолевых клетках in vitro под влиянием противоопухолевых препаратов цисплатин, таксол и доксорубицин с помощью флуоресцентного сенсора NMD. Изучена динамика изменения сигнала сенсора NMD в ходе роста опухоли in vivo на иммунокомпетентных мышах. Проведена визуализация пространственного паттерна активности NMD в опухолевых тканях. 3. Проведена визуализация индукции апоптоза в опухолевых клетках под воздействием противоопухолевых препаратов цисплатин и иринотекан с помощью дальне-красного FRET-сенсора активности каспазы-3. 4. C помощью флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения визуализирована ультраструктура актинового цитоскелета клеток в составе опухоли в мышиных моделях. Оценены перестройки тонкой структуры актина в опухолевой ткани в ответ на химиотерапию противоопухолевым препаратом таксол, а также цитохалазином D. 5. Исследована динамика изменений метаболических показателей (рН, НАДН, ФАД) в модели опухолевых сфероидов в процессе применения химиопрепаратов таксол и цисплатин. На мышиной опухолевой модели оценены изменения метаболического статуса опухолевых клеток in vivo в процессе химиотерапии таксолом. Выявлены ранние эффекты воздействия на опухоль химиопрепаратом. 6. На основе полученных данных выбраны два показателя опухолевых клеток - метаболический статус (НАДН) и структура актинового цитоскелета. Показано, что их изменения могут служить информативными маркерами раннего ответа опухоли на химиотерапию. 7. Охарактеризован ранний ответ экспериментальных опухолей мыши на применение противоопухолевого препарата таксол с помощью анализа тонкой структуры актина методом флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения и детектирования времени жизни сигнала автофлуоресценции НАДН методом in vivo FLIM микроскопии. 8. Продемонстрирована возможность детекции сигнала ОКТ от гранул кремнезема, образуемых в результате активности силикатеина, в клетках, культивированных in vitro. 9. Получена обширная база данных о мутантных вариантах GFP, с помощью которой построен локальный “ландшафт приспособленности” на уровне целого белка. Получен мутантный вариант EYFP с многократно повышенной фотостабильностью.

Публикации

1. Богданов А.М., Ачария А., Тайтелмейер А.В., Мамонтова А.В., Бравая К.Б., Коломейский А.Б., Лукьянов К.А., Крылов А.И. Turning On and Off Photoinduced Electron Transfer in Fluorescent Proteins by π-Stacking, Halide Binding, and Tyr145 Mutations J Am Chem Soc., 138(14):4807-17 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1021/jacs.6b00092

2. Гурская Н.Г., Переверзев А.П.,Староверов Д.Б., Маркина Н.М., Лукьянов К.А. Analysis of Nonsense-Mediated mRNA Decay at the Single-Cell Level Using Two Fluorescent Proteins. Methods Enzymol., 572:291-314 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1016/bs.mie.2016.02.007.

3. Гурская Н.Г., Староверов Д.Б., Лукьянов К.А. Fluorescent Protein-Based Quantification of Alternative Splicing of a Target Cassette Exon in Mammalian Cells. Methods Enzymol., 572:255-68 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1016/bs.mie.2016.02.007

4. Клементьева Н.В., Лукьянов К.А., Маркина Н.М., Лукьянов С.А., Загайнова Е.В., Мишин А.С. Green-to-red primed conversion of Dendra2 using blue and red lasers Chem Commun (Camb)., 18;52(89):13144-13146 (год публикации - 2016)

5. Клементьева Н.В., Снопова Л.Б., Проданец Н.Н., Фурман О.Е., Дуденкова В.В., Загайнова Е.В., Лукьянов К.А., Мишин А.С. Fluorescence Imaging of Actin Fine Structure in Tumor Tissues Using SiR-Actin Staining Anticancer Res., 36(10):5287-5294 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.21873/anticanres.11100

6. Клементьева Н.В., Фурман О.Е., Мишин А.С., Лукьянов К.А., Загайнова Е.В. Флуоресцентная визуализация изменений актинового цитоскелета в опухолевых клетках под воздействием химиотерапевтических агентов Вестник РГМУ, 2016 (4), 15-20 (год публикации - 2016)

7. Кост Л.А., Путинцева Е.В., Переверзева А.Р., Чудаков Д.М., Лукьянов К.А., Богданов А.М. Бимолекулярная флуоресцентная комплементация на основе красного флуоресцентного белка FusionRed Биоорганическая химия, 42 (6), 683–688 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.7868/S0132342316060051

8. Плетнева Н.В., Плетнев В.З., Саркисян К.С., Горбачев Д.А., Егоров Е.С., Мишин А.С., Лукьянов К.А., Даутер З., Плетнев С. Crystal Structure of Phototoxic Orange Fluorescent Proteins with a Tryptophan-Based Chromophore PLoS One, 10(12):e0145740 (год публикации - 2015) https://doi.org/10.1371/journal.pone.0145740

9. Рюмина А.П., Серебровская Е.О., Староверов Д.Б., Злобовская О.А., Щеглов А.С., Лукьянов С.А., Лукьянов К.А. Lysosome-associated miniSOG as a photosensitizer for mammalian cells. BioTechniques, 61:92-94 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.2144/000114445

10. Саркисян К.С., Болотин Д.А., Меер М.В., Усманова Д.Р., Мишин А.С., Шаронов Г.В., Иванков Д.Н., Божанова Н.Г., Баранов М.С., Сойлемез О., Богатырева Н.С., Власов П.К., Егоров Е.С. Local fitness landscape of the green fluorescent protein. Nature, 533(7603):397-401 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1038/nature17995

11. Ачария А., Богданов А.М., Григоренко Б.Л., Бравая К.Б., Немухин А.В., Лукьянов К.А., Крылов А.И. Photoinduced Chemistry in Fluorescent Proteins: Curse or Blessing? Chem. Rev., - (год публикации - 2016) https://doi.org/10.1021/acs.chemrev.6b00238

12. Клементьева Н.В., Загайнова Е.В., Лукьянов К.А., Мишин А.С. Принципы флюоресцентной микроскопии cверхвысокого разрешения Современные технологии в медицине, 8 (2), 130-140 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.17691/stm2016.8.2.17

13. Южакова Д.В., Ширманова М.В., Сергеева Т.Ф., Загайнова Е.В.,Лукьянов К.А. Иммунотерапия злокачественных новообразований Современные технологии в медицине, 8(1): 173–182 (год публикации - 2016) https://doi.org/10.17691/stm2016.8.1.23

Возможность практического использования результатов
не указано