Аннотация результатов, полученных в 2024 году
В отчетном 2024 году исследована индукция сенесцентности темозоломидом в клеточных линиях глиобластомы человека U87MG, U251, T98G и А172, а также первичных клеточных культур 011, 019, 022 и 067, отобранных с биопсийных образцов пациентов НМИЦ нейрохирургии им. ак. Н.Н. Бурденко с диагностированной глиобластомой. Выявлен гетерогенный ответ различных клеточных культур на индукцию сенесцентности темозоломидом. При этом наиболее ярко выраженные черты сенесцентности наблюдались в клетках линии U87MG. Скрининг клеточных культур глиобластомы человека на чувствительность к агонисту рецептора смерти DR5 – рецептор-специфичному варианту цитокина TRAIL DR5-B показал, что линии клеток U87MG, U251, А172 и первичные образцы 022 и 067 резистентны к цитокину DR5-B, тогда как линия T98G и образцы 011 и 019 обладают чувствительностью к DR5-B. При совместной инкубации с темозоломидом в субтоксичной концентрации выявлен синергичный эффект на клеточной линии А172 и образце 067. В остальных клеточных культурах добавление темозоломида не усиливало цитотоксичность DR5-B. При этом дальнейшее исследование сенолитической активности агониста рецептора DR5, рецептор-специфичного варианта TRAIL DR5-B, показало, что повышение чувствительности клеток глиобластомы к DR5-B коррелирует с выраженностью сенесцентного фенотипа в конкретной клеточной культуре при длительном воздействии темозоломида в субтоксичной концентрации, и сопровождается повышением экспрессии рецептора-мишени DR5 на поверхности клеток. Анализ дифференциальной экспрессии генов в клетках глиобластомы под действием темозоломида в субтоксичной концентрации показал активацию провоспалительных сигнальных путей и стимуляцию экспрессии генов, связанных с сигнализацией TRAIL. Полученные результаты позволяют предположить, что в ходе развития клеточной сенесцентности в клетках глиобластомы под действием темозоломида повышается экспрессия проапоптотических генов и активируется внешний сигнальный путь апоптоза.

Аннотация результатов, полученных в 2025 году
В отчетном 2025 году проведено сравнительное исследование противоопухолевого действия DR5-специфичного варианта цитокина TRAIL DR5-B in vivo на ксенотрансплантатной модели опухоли глиобластомы человека U87MG в иммунодефицитных мышах Nude в двух альтернативных режимах. В режиме 1 (параллельном) курс лечения темозоломидом проводили одновременно с курсом лечения рекомбинантным препаратом DR5-B. В режиме 2 (последовательном) сначала проводили курс лечения темозоломидом с последующим курсом лечения препаратом DR5-B. В результате выявлено, что как темозоломид, так и DR5-B проявляют противоопухолевую активность в отношении ксенографтов глиобластомы U87MG. При комбинировании двух препаратов противоопухолевое действие значительно усиливалось, однако не было выявлено статистически значимых различий в противоопухолевой эффективности комбинации препаратов в разных режимах. Была исследована индукция сенесцентности в опухолевых ксенотрансплантатах на основе клеточной линии глиобластомы человека U87MG в иммунодефицитных мышах под действием темозоломида методом иммуногистохимического окрашивания опухолевых срезов на экспрессию ингибитора клеточного цикла р21 и маркера клеточной пролиферации Ki-67. Было выявлено, что в опухолях после лечения темозоломидом значительно возрастает экспрессия р21 и снижается экспрессия Ki-67. Повышение экспрессии р21 под действием темозоломида также показано методом вестерн блота, что указывает на остановку клеточного цикла, опосредованно свидетельствующую о развитии сенесцентности. Была исследована химио-индуцированная сенесцентность в опухолевых клеточных линиях иного происхождения, а именно рака поджелудочной железы (РПЖ) человека MIA PaCa-2, PANC-1, BxPC-3 и AsPC-1 под действием химиопрепаратов гемцитабина и доксорубицина. Выявлено, что клеточные линии РПЖ обладали различной восприимчивостью к индукции сенесцентности. Исследование комбинации нескольких маркеров, включающих окрашивание на активность SA-β-gal, клеточную пролиферацию и экспрессию генов CDKN1A (p21) и CDKN1B (p27) показало, что в клетках линии MIA PaCa-2 наблюдалось формирование классического сенесцентного фенотипа после инкубации с химиопрепаратами, в линиях AsPC-1 и PANC-1 присутствовали частичные признаки сенесцентности, а в BxPC-3 они отсутствовали. Это отражает гетерогенность клеток РПЖ и создает предпосылки для различной восприимчивости этих клеток к последующей сенолитической терапии. При воздействии гемцитабином либо доксорубицином на клетки нормальных человеческих фибробластов признаков сенесцентности не наблюдалось. Для оценки сенолитического потенциала агониста рецептора DR5, DR5-cелективного варианта цитокина TRAIL DR5-B на клеточных линиях РПЖ была исследована его цитотоксичность после пред-инкубации с доксорубицином или гемцитабином. Инкубация клеток с гемцитабином или доксорубицином приводила к значительному повышению поверхностной экспрессии рецептора DR5 в клетках MIA PaCa-2, PANC-1 и AsPC-1. Закономерно, наблюдалась выраженная сенсибилизация клеток MIA PaCa-2 и PANC-1 к DR5-B. В клетках BxPC-3 сенолитический эффект отсутствовал. Полученный результат согласуется с тем, что эти клетки также не формировали сенесцентный фенотип. В резистентных к DR5-B клетках AsPC-1 сенолитический эффект DR5-B не наблюдался. При этом инкубация AsPC-1 с доксорубицином или гемцитабином сопровождалась значительным ростом экспрессии cFLIP, ключевого негативного регулятора сигнального пути апоптоза, индуцируемого рецепторами смерти, включая DR5, что может объяснять отсутствие сенолитического эффекта DR5-B в этой линии. В результате выполнения проекта в 2025 году оценена перспектива применения DR5-B и других агонистов рецептора DR5, которые в настоящее время находятся в разработке, для сенолитической терапии пациентов с глиобластомой, прошедших первую линии химиотерапии темозоломидом. Кроме того, оценена перспектива применения агонистов рецептора DR5 на основе препарата DR5-B в альтернативной нозологии рака поджелудочной железы человека.