Структурно-функциональная характеристика биомакромолекул и их комплексов для решения фундаментальных и практических задач в области биотехнологии и медицины

КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Номер проекта 23-74-30004

НазваниеСтруктурно-функциональная характеристика биомакромолекул и их комплексов для решения фундаментальных и практических задач в области биотехнологии и медицины

Руководитель Попов Владимир Олегович, Доктор химических наук

Организация финансирования, регион Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" , г Москва

Конкурс №81 - Конкурс 2023 года по мероприятию «Проведение исследований научными лабораториями мирового уровня в рамках реализации приоритетов научно-технологического развития Российской Федерации» Президентской программы исследовательских проектов, реализуемых ведущими учеными, в том числе молодыми учеными

Область знания, основной код классификатора 04 - Биология и науки о жизни; 04-202 - Протеомика; структура и функции белков

Ключевые слова Пространственная структура, структурная биология, биокатализатор, биотехнология, антитела, эпитоп, медь-содержащие белки, стереоселективное восстановительное аминирование

Код ГРНТИ34.15.15

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Аннотация
Структурная биология, наряду с системной и синтетической биологией является одним из краеугольных камней современной науки о жизни. Детальная структурная информация о пространственном строении природных макромолекул революционизировала наши представления о базовых процессах, происходящих в живой клетке, и способствовала решению практически важных задач, таких как разработка лекарственных препаратов, создание и оптимизация биокатализаторов. Расширение знаний о структуре биомакромолекул и их комплексов, в частности, представляющих интерес для решения практических задач биомедицины и биотехнологии, является актуальной и своевременной задачей. Проект сфокусирован на структурно-функциональной характеристике трех важных групп биологических объектов: 1. Вируснейтрализующие миниантитела против коронавирусной и гриппозной инфекций. Будет определен эпитопный ландшафт наиболее перспективных клонов с высокой вируснейтрализующей активностью. Исследование механизма связывания антител с соответствующими антигенами и определение конкретного эпитопа путем расшифровки пространственной структуры таких комплексов предоставит новую информацию о консервативности эпитопов существующих антител, которая позволит усовершенствовать найденные эффективные варианты антител методами белковой инженерии, а также выгодно использовать их аддитивное действие при создании гибридных поливалентных конструкций. 2. Ферменты, катализирующие реакции стереоселективного восстановительного аминирования кетонов, кетокислот и альдегидов. Будет создан задел для разработки на их основе эффективных биокатализаторов для получения оптически чистых аминов и соединений с хиральной аминогруппой для решения задач тонкого органического синтеза. В рамках проекта планируется провести комплексную структурную и функциональную характеристику предварительно отобранных ферментов из архей и экстремофильных бактерий, катализирующих стереоселективное восстановительное аминирование, в частности, восстанавливающие аминазы, (R)-стереоспецифичные трансаминазы, дегидрогеназы D-аминокислот, иминредуктазы. 3. Медь-содержащие оксидоредуктазы и белки, отвечающие за связывание и транспорт ионов меди. Будет продолжено исследование свойств, структуры и механизма действия открытого в нашей лаборатории нового фермента - тиоцианатдегидрогеназы (TcDH), содержащего в активном центре трехядерный медный кластер, строение которого не имеет аналогов у других медь-зависимых ферментов. Анализ генных кластеров у бактерий разных классов, в которые входит ген TcDH, показал присутствие генов белков, отвечающих за связывание, транспорт и регуляцию содержания ионов меди в клетках этих организмов. Важным направлением дальнейшей работы будет выделение, структурная и функциональная характеристика белков-переносчиков ионов меди, характеристика взаимодействия их с TcDH, анализ механизма транспорта ионов меди от белков-переносчиков в активный центр фермента. В результате выполнения проекта будут получены пространственные структуры комплексов белковых антигенов с вируснейтрализующими антителами против двух социально значимых вирусных инфекций - COVID-19 и гриппа. Будет проведено картирование соответствующих эпитопов, что позволит рационализировать и ускорить разработку лекарственных препаратов на основе терапевтических антител против широкого спектра вариантов этих вирусов. Будут проведены поиск и структурно-функциональная характеристика ферментов, катализирующих стереоселективное восстановительное аминирование органических соединений, с целью создания задела для разработки на их основе эффективных биокатализаторов для биотехнологии. Будут изучены структура и функции бактериальных медь-содержащих оксидоредуктаз, а также механизмы направленного транспорта и регулирования уровня ионов меди в клетках бактерий, обеспечивающие устойчивость организмов к изменениям концентрации меди в окружающей среде.

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Публикации

1. Сорокин Д.Ю., Тихонова Т.В., Кох Х., Ван ден Берг Е.М., Хиндеркс Р.С., Пабст М., Дергоусова Н.И., Соловьева А.Ю., Куенен Г., Попов В.О., Ван Лусдрехт М.С., Люкер С. Trichlorobacter ammonificans, a dedicated acetate-dependent ammonifer with a novel module for dissimilatory nitrate reduction to ammonia ISME Journal, v.17:1639-1648 (год публикации - 2023)
10.1038/s41396-023-01473-2

2. Шилова С.А., Матюта И.О., Петрова Е.С., Николаева А.Ю., Ракитина Т.В., Миняев М.Е., Бойко К.М., Попов В.О., Безсуднова Е.Ю. Expended substrate specificity in D-amino acid transaminases: a case study of transaminase from Blastococcus saxobsidens International Journal of Molecular Sciences, V.24, 16194 (год публикации - 2023)
10.3390/ijms242216194

3. Варфоломеева Л.А., Поляков К.М., Комолов А.С., Ракитина Т.В., Дергоусова Н.И., Дороватовский П.В., Бойко К.М., Тихонова Т.В., Попов В.О. Улучшение дифракционных свойств кристаллов тиоцианатдегидрогеназы Кристаллография, Т.68, № 6, 888-893 (год публикации - 2023)
10.31857/S0023476123600799

4. Бойко К.М., Варфоломеева Л.А., Егоркин Н.А., Миняев М.Е., Алексеева И.А., Фаворская И.А., Рябова Е.И., Прокофьев В.В., Есмагамбетов И.Б., Щебляков Д.В.,Логунов Д.Ю., Гинцбург А.Л., Попов В.О., Случанко Н.Н. Получение и кристаллографический анализ комплекса рецепторсвязывающего домена SARS-CoV-2 и вируснейтрализующего наноантитела. Кристаллография, Т.68, №6, 866-873 (год публикации - 2023)
10.31857/S0023476123600830

5. Жамгочян Х.Х., Замахаев М.В., Случанко Н.Н., Гончаренко А.В., Шумков М.С. СОЗДАНИЕ СИСТЕМЫ ГЕТЕРОЛОГИЧНОЙ ЭКСПРЕССИИ И ОПТИМИЗАЦИЯ СПОСОБА НАРАБОТКИ β-СУБЪЕДИНИЦЫ ХОЛЕРНОГО ТОКСИНА В КЛЕТКАХ E. coli Биохимия, Т.88, №9, 1581-1596 (год публикации - 2023)
10.31857/S0320972523090105

Аннотация результатов, полученных в 2024 году
Работа по проекту проводилась в трех направлениях. Первое направление – нейтрализующие антитела – связано с созданием препаратов для терапии инфекционных заболеваний. Полученные в НИЦЭМ Гамалеи однодоменные антитела Р2С5 и B10 к рецептор-связывающему домену RBD SARS-COV-2, а также антитела H5.2 и C4.2 к клостридиальному токсину А были использованы в настоящей работе для характеристики свойств комплексов и получения их пространственной структуры. Получен комплекс антитела P2C5 с RBD коронавируса SARS-CoV-2 и установлена его пространственная структура c разрешением 3.1 Å. В структуре идентифицирован интерфейс антиген-антитело, локализация которого объясняет механизм нейтрализации за счет блокирования связывания RBD с рецептором ACE2 на поверхности клеток, а также механизм уклонения новейших вариантов коронавируса, таких как Delta и Omicron XBB, от действия антитела Р2С5 за счет того, что соответствующие мутации L452R и F490S располагаются в интерфейсе с антителом Р2С5. Показано, что антитела Р2С5 и В10 имеют пересекающиеся эпитопы. Получен комплекс антитела B10 с RBD-доменом и выращены кристаллы комплекса, для которых показана дифракция на лабораторном источнике рентгеновского излучения. Получены и охарактеризованы однодоменные антитела к рецептор-связывающему домену CROPs токсина А патогенной бактерии C. difficile. Произведена количественная оценка нейтрализующей активности антител H5.2 и C4.2, в результате чего установлено, что наиболее эффективным является антитело C4.2. Произведено картирование эпитопа и показано, что оба антитела узнают С-концевой фрагмент в составе CROPs домена. Для объяснения механизма действия получены комплексы антител с общим фрагментом CROPs, несущим новый эпитоп для этих антител, и установлены их пространственные структуры. Определена стехиометрия комплексов каждого из антител с протяженным CROPs доменом, несущим множество QTIN-подобных мотивов в своем составе. Второе направление исследований в рамках проекта – ферменты для стереоселективного восстановительного аминирования. Эта реакция заключается в присоединении аминогруппы к субстратам с кетогруппой, а продуктом такого присоединения является оптически чистый амин или соединение с хиральной аминогруппой. На предыдущем этапе проекта были отобраны аминокислотные последовательности, кодирующие разные по природе и механизму катализа ферменты, общим для которых является способность к стереоселективному присоединению аминогруппы к субстрату с кетогруппой (кетокислоте и кетону): (1) R-аминпируват трансаминаза из грамположительной бактерии Micromonospora aurantiaca, (2) аминдегидрогеназа из гипертермофильной археи Vulcanisaeta moutnovskia, (3) дегидрогеназа D-аминокислот из гипертермофильной археи Pyrococcus sp. На этапе 2024 г получены штаммы-продуценты рекомбинантных форм целевых ферментов, оптимизированы условия экспрессии, разработаны методики выделения чистых активных препаратов двух ферментов – R-аминпируват трансаминазы и дегидрогеназы D-аминокислот – из биомассы штаммов-продуцентов. Новые ферменты выделены и проанализированы в реакциях восстановительного аминирования кетокислот и кетонов. Для трансаминазы из M. aurantiaca изучен спектр субстратов аминодоноров, для дегидрогеназы D-аминокислот из Pyrococcus sp. показана активность в реакция аминирования альфа-кетокислот. Определено, что оба фермента термостабильны, оптимальные температуры реакции превысили 50 °С. Для трансаминазы из M. aurantiaca проведена кристаллизация и получены пригодные для рентгеноструктурного эксперимента кристаллы. Для трансаминазы из D.tiedjei в рамках анализа стабильности трансаминаз в водно-органических растворах показано повышение стабильности холофермента путем введения 20% ДМСО в реакцию и повышения доли кетосубстрата в реакционной смеси. Третье направление исследований – функциональная характеристика медь-содержащих оксидоредуктаз и белков, отвечающих за связывание и транспорт ионов меди. В рамках этого направления продолжено изучение медь-содержащего фермента тиоцианатдегидрогеназы (TcDH), а также белков, гены которых расположены в одном кластере с геном TcDH и коэкспрессируются вместе с ним при росте клеток на тиоцианате. Одним из таких белков является одногемовый цитохром С552, который может выполнять функцию акцептора электронов в катализируемой TcDH реакции окисления тицианата. Особенностью С552 является наличие неупорядоченных His-богатых мотивов на N- и C-концах полипептидной цепи, которые могут связывать до 6 ионов меди 2+, выполняя таким образом функцию запасания ионов меди в периплазме. Удаление N- и С- фрагментов в молекуле С552 не влияет на сродство к TcDH, но снижает редокс потенциал гема С552 и эффективность его как акцептора электронов в тиоцианатдегидрогеназной реакции. Для дальнейшей детализации молекулярного механизма действия TcDH получены и охарактеризованы новые мутанты с заменой функционально значимых остатков активного центра, проводится кристаллизация полученных мутантов для определения пространственной структуры методом рентгеноструктурного анализа и анализа роли этих остатков в каталитическом действии TcDH. Продолжено исследование электронного состояния трехядерного медного кластера, входящего в состав активного центра TcDH. ЭПР эксперименты, выполненные в высокочастотном Q- диапазоне (34.15 ГГц) для нативной формы TcDH и Cu-деплецированных мутантов, подтвердили ранее сделанные предположения, что каталитический кластер содержит два парамагнитных (Cu2+) и один диамагнитный (Cu1+) центр, степень окисления которого не изменяется в ходе каталитического цикла. Титрование pmTcDH субстратом тиоцианатом приводит к восстановлению одного из двух парамагнитных ионов меди активного центра в процессе реакции.

Публикации

1. Бакунова А.К., Матюта И.О., Николаева А.Ю., Ракитина Т.В., Бойко К.М., Попов В.О., Безсуднова Е.Ю. From structure to function: analysis of the first monomeric pyridoxal-5’-phosphate dependent transaminase from the bacterium Desulfobacula toluolica Biomolecules, V. 14, № 12: 1591 (год публикации - 2024)
10.3390/biom14121591

2. Бакунова А.К., Матюта И.О., Миняев М.Е., Исайкина Т.Ю., Бойко К.М., Попов В.О., Безсуднова Е.Ю. Multifunctionality of arginine in the active sites of non-canonical D-amino acid transaminases Archives of Biochemistry and biophysics , Vol. 756, 110011 (год публикации - 2024)
10.1016/j.abb.2024.110011

3. Варфоломеева Л.А., Соловьева А.Ю., Шипков Н.С., Дергоусова Н.И., Миняев М.Е., Бойко К.М., Тихонова Т.В., Попов В.О. Влияние ионов меди на упаковку и конформацию тиоцианатдегидрогеназы в кристалле Кристаллография (год публикации - 2025)

4. Бакунова А.К., Матюта И.О., Николаева А.Ю., Бойко К.М., Хомутов А.Р., Безсуднова Е.Ю., Попов В.О. Взаимодействие трансаминазы D-аминокислот из Haliscomenobacter hydrossis с 3-аминооксипропионовой кислотой: спектральный и структурный анализ ACTA NATURAE, T.16, № 3, C. 18-24 (год публикации - 2024)
10.32607/actanaturae.27496

5. Варфоломеева Л.А., Шипков Н.С., Дергоусова Н.И., Бойко К.М., Хренова М.Г., Тихонова Т.В., Попов В.О. Molecular mechanism of thiocyanate dehydrogenase at atomic resolution International Journal of Biological Macromolecules , Vol. 279, Part 1, 135058 (год публикации - 2024)
10.1016/j.ijbiomac.2024.135058

6. Случанко Н.Н., Щебляков Д.В., Варфоломеева Л.А., Фаворская И.А., Должикова И.А., Коробкова А.И., Алексеева И.А., Есмагамбетов И.В., Деркаев А.А., Прокофьев В.В., Зорков И.Д., Логунов Д.Ю., Гинзбург А.Л., Попов В.О., Бойко К.М. Structural basis for evasion of new SARS- CoV-2 variants from the potent virus-neutralizing nanobody targeting the S-protein receptor-binding domain. Biochemistry (Moscow), Vol. 89, N 7, P. 1-13 (год публикации - 2024)
10.1134/S0006297924070083

7. Случанко Н.Н., Соколова И.В., Фаворская И.А., Есмагамбетов И.Б., Тухватулин А.И., Алексеева И.А., Унгур А.С., Варфоломеева Л.А., Бойко К.М., Логунов Д.Ю., Гинсбург А.Л., Попов В.О., Щебляков Д.В., Белый Ю.Ф. Structural insight into recognition of Clostridioides difficile oxin A by novel neutralizing nanobodies targeting QTIN-like motifs within its receptor-binding domain International Journal of Biological Macromolecules , Vol. 283, Part 4 (год публикации - 2024)
doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2024.137910

Аннотация результатов, полученных в 2025 году
Работа по проекту проводилась в трех направлениях. Первое направление – нейтрализующие антитела – связано с созданием препаратов для терапии инфекционных заболеваний. В рамках данного направления исследовался набор однодоменных верблюжьих нейтрализующих антител, полученных в НИЦЭМ им. Н. Ф. Гамалеи, против ряда вирусных и бактериальных инфекций. Была установлена пространственная структура комплекса широко нейтрализующего антитела В10 с RDB-доменом SARS-CoV-2 с разрешением 1.5А, которая позволила детализировать эпитоп антитела, показать, что он конкурирует за связывание с клеточным рецептором АСЕ2 и предложить объяснение почему антитело В10 эффективно по отношению ко всем известным на сегодняшний момент штаммам вируса. Детали работы приведены в публикации (DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2025.145386). Были исследованы два антитела A3.2 и A1.3, способные узнавать клостридиальный токсин В в иммуноферментном анализе. Картирование указанных антител показало, что они связываются в области глюкозилтрансферазного и CROPS доменов токсина. Методом криоЭМ была установлена структура комплекса токсина B с антителом А3.2 с разрешением 2.7Å. Было охарактеризовано новое широко нейтрализующее антитело G2.3 к гемагглютинину вируса гриппа А. Получен стехиометрический комплекс указанных белков и установлена его криоЭМ структура с разрешением 2.5Å, продемонстрировавшая что G2.3 связывается в области относительно консервативного стеблевого домена гемагглютинина и это взаимодействие затрагивает остатки обеих его субъединиц - HA1 и HA2. Проведен анализ структуры и консервативности эпитопа, показавший корреляцию с широкой вируснейтрализующей активностью G2.3 по отношению к гемагглютининам группы 1. Второе направление исследований в рамках проекта – ферменты для стереоселективного восстановительного аминирования, биотехнологически значимого процесса получения оптически чистых аминов и соединений с аминогруппой. В рамках этого направления продолжена структурно-функциональная характеристика ферментов. Детально исследованы активность, стабильность и субстратная специфичность пиридоксаль-5’-фосфат (PLP) – зависимой R-аминпируват трансаминаза из M. aurantica (Mic_TA), и NAD(P) – зависимой дегидрогеназы из археи Pyrococcus sp. (DDAA_Pyr). Показаны высокая термостабильность обоих ферментов, так активность DDAA_Pyr анализировали при 60-70°С. Разработана двухферментная система синтеза оптически активных D-аминокислот на основе дегидрогеназы DDAA_Pyr и глюкоздегидрогеназы (для рециклизации NAD(P)). Эффективность системы показана в синтезе биотехнологически значимых соединений D-фенилаланина, D-фенилглицина и D-гомофенилаланина, энантиомерный избыток составил 99%, выход целевого продукта составил 63-99 %%. Проведена кристаллизация Mic_TA и DDAA_Pyr, в результате рентгеноструктурно эксперимента собраны наборы дифракционных данных с кристаллов ферментов, наборы обработаны, структуры ферментов решены. В настоящее время имеются структуры апо- и холоферментов, что позволило провести анализ активного центра и строения функциональной единицы ферментов. Структурные данные далее будут применены для поиска сайтов замен с целью получения вариантов ферментов для решения разных биотехнологических и фундаментальных задач. Продолжено исследование стабильности ферментов в водно-органических средах, на основе таких растворителей как цирен, метанол и диметилсульфоксид. Разработаны, получены и проанализированы варианты PLP-зависимой трансаминазы из бактерии D. tiedjei, найден вариант с заменой T199Q с повышенной стабильностью в реакционных условиях. Показан стабилизирующий эффект 20% ДМСО на дегидрогеназу DDAA_Pyr. Третье направление исследований – функциональная характеристика медьсодержащих оксидоредуктаз и белков, отвечающих за связывание и транспорт ионов меди: Ранее в нашей лаборатории впервые был выделен и охарактеризован фермент из галоалкалофильной бактерии Thioalkalivibrio paradoxus, – тиоцианатдегидрогеназа (tpTcDH), способный катализировать ферментативную реакцию разложения тиоцианата до цианата и серы с переносом двух электронов на внешний акцептор. Было показано, что в активном центре TcDH содержится три иона меди, в формировании его структуры принимают участие 10 аминокислотных остатков, которые могут быть маркерами для отнесения белка к тиоцианатдегидрогеназам. Данный этап работы посвящен изучению наиболее удаленных гомологов tpTcDH (идентичность с tpTcDH по аминокислотной последовательности менее 33 %), сохранивших аминокислотный шаблон без изменений. Ген такого белка был обнаружен в геноме бактерии Thiohalobacter thiocyanaticus (ttTcDH), для которой ранее была показана способность к росту на тиоцианате в качестве единственного источника азота и энергии. Был выделена и охарактеризована нативная форма ttTcDH. Обнаружено, что ttTcDH существует в растворе в виде смеси свободной формы и устойчивого комплекса с тиоредоксинподобным белком (ttTLP), ген которого предшествует гену ttTcDH в геноме Th. thiocyanaticus HRh1. Ферментативной активностью после насыщения ионами меди обладает только ttTcDH в комплексе с ttTLP, свободная ttTcDH активностью не обладает. Получены в клетках E. coli и исследованы рекомбинантные ttTcDH и ttTLP. Показано, что рекомбинантные ttTcDH и ttTLP в присутствии ионов меди образуют in vitro стабильный ферментативно-активные белковый комплекс с двумя типами стехиометрии: 1:1 и 2:2. Показано высокое сродство между белками-партнерами. Кинетические константы, полученные для нативного и рекомбинантного комплексов, совпадают. Было показано, что ttTLP является необходимым компонентом формирования ферментативно-активного комплекса, так как влияет на процесс встраивания меди в активный центр ttTcDH.

Публикации

1. Варфоломеева Л.А., Соловьева А.Ю., Шипков Н.С.. Случанко Н.Н., Бойко К.М., Хренова М.Г., Тихонова Т.В., Попов В.О. Relationship between the structure and physicochemical properries of cytochrome C 546/556 from the bacterium Thioalkalibrio paradoxus ARh1 Biochemical and Biophysical Research Communications, Vol.778, 152340 (год публикации - 2025)
10.1016/j.bbrc.2025.152340

2. Перфилова К.В., Матюта И.О., Миняев М.Е., Бойко К.М., Кулей Р.В., Случанко Н.Н. High-resolution structure reveals enhanced 14-3-3 binding by mutant SARS-CoV-2 nucleoprotein variant with improved replicative fitness Biochemical and Biophysical Research Communications , Vol.767, 151915 (год публикации - 2025)
10.1016/j.bbrc.2025.151915

3. Щебляков Д.В., Фаворская И.А., Должикова И.В., Коробкова А.И., Алексеева И.А., Есмагамбетов И.Б., Воронина О.Л., Тухватулин А. И., Зубкова О.В., Деркаев А.А., Рябова Е.И., Илюхина А.А., Зорков И.Д., Грусова Д.М., Решетников Д.А., Рыжова Н.Н., Ермолова Е.И., Кунда М.С., Матюта И.О., Бойко К.М., Попов В.О., Логунов Д.Ю., Случанко Н.Н., Гинзбург А.Л. Ultra-potent RBM-specific single-domain antibody broadly neutralizes multiple SARS-CoV-2 variants with picomolar activity International Journal of Biological Macromolecules, Vol. 319, 145386 (год публикации - 2025)
10.1016/j.ijbiomac.2025.145386

4. Бакунова А.К., Рудина Ю.В., Попов В.О., Безсуднова Е.Ю. Contribution of second-shell residues to PLP-dependent transaminase catalysis: a case study of D-amino-acid transaminase from Desulfomonile tiejei International Journal of Molecular Sciences, Vol. 26, 8536 (год публикации - 2025)
10.3390/ijms26178536

5. Соловьева А.Ю., Куликова О.Г., Варфоломеева Л.А., Дергоусова Н.И., Бойко К.М., Хренова М.Г., Тихонова Т.В., Попов В.О. CopC as a potential metallochaperone delivering copper ions to the active site of a thiocyanate dehydrogenase International Journal of Biological Macromolecules, Vol.322, 146801 (год публикации - 2025)
10.1016/j.ijbiomac.2025.146801

6. Бакунова А.К., Шилова С.А., Попов В.О., Безсуднова Е.Ю. Amino Acid Transaminases: Structural Diversity, Catalytic Properties, and Potential Applications Biochemistry (Moscow), Vol. 91, N1 (год публикации - 2026)
10.1134/S0006297925603247