Разработка панели молекулярных маркеров для неинвазивной диагностики и прогнозирования пролиферативного потенциала тканей шейки матки у ВПЧ инфицированных пациентов с учетом вакцинации

КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Номер проекта 18-75-10097

НазваниеРазработка панели молекулярных маркеров для неинвазивной диагностики и прогнозирования пролиферативного потенциала тканей шейки матки у ВПЧ инфицированных пациентов с учетом вакцинации

Руководитель Стародубцева Наталия Леонидовна, Кандидат биологических наук

Организация финансирования, регион федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И.Кулакова» Министерства здравоохранения Российской Федерации , г Москва

Конкурс №30 - Конкурс 2018 года по мероприятию «Проведение исследований научными группами под руководством молодых ученых» Президентской программы исследовательских проектов, реализуемых ведущими учеными, в том числе молодыми учеными

Область знания, основной код классификатора 05 - Фундаментальные исследования для медицины; 05-221 - Акушерство и гинекология

Ключевые слова цервикальные интраэпителиальные неоплазии, диагностика, протеомика, метаболомика, молекулярная генетика, масс-спектрометрия, вирус папиломы человека, цервиковагинальная жидкость, «малые» поражения шейки матки

Код ГРНТИ76.29.48

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Аннотация
Рак шейки матки является третье по распространенности среди онкологических заболеваний органов репродуктивной системы у женщин в мире, причем количество новых выявленных случаев постоянно увеличивается, что ставит на первое место необходимость более эффективного скрининга на ранних стадиях развития патологии при эпителиальных неоплазиях шейки матки. С другой стороны, вакцины против ВПЧ могут значительно снизить частоту заражения высокоонкогенными типами (вр) ВПЧ, основного возбудителя рака шейки матки. Несмотря на достижения в области вакцинации против ВПЧ, эти вакцины не охватывают все типы врВПЧ и менее эффективны у женщин, ранее инфицированных ВПЧ. Более того, осторожный мониторинг программ вакцинации также требует точных методов обнаружения. Постепенное развитие рака шейки матки (от 1 до 10 лет) через нескольких предраковых стадий и относительная легкость, с которой можно предотвратить опухоль на ранних стадиях, обусловливает необходимость скрининга при профилактических осмотрах. Программы скрининга рака шейки матки, как правило, основаны на обнаружении врВПЧ по анализам на вирусную ДНК (РНК) и на обнаружении цитологических и/или молекулярных изменений в клетках эпителия с помощью различных методов окрашивания, таких как мазок Папаниколау. Недостатком таких диагностических методов является высокий процент ложноотрицательных результатов, а также невозможность определения риска малигнизации процесса. Результатом является зачастую неоправданно большое количество исследований и лечение женщин с клинически нерелевантными инфекциями врВПЧ и банальным цервицитом, что увеличивает затраты и возможный вред, причиняемый лечением. С другой стороны, недостаточно радикальное лечение пациентов с высоким риском злокачественной трансформации может иметь очень тяжелые последствия. Таким образом, необходимы дополнительные тесты на базе современных высокоточных методов, в частности, масс-спектрометрии, чтобы обеспечить объективную и воспроизводимую основу для отбора пациентов с клинически значимым заболеванием. К сожалению, биомаркеры с хорошими прогнозирующими значениями на данный момент не существуют. Вследствие недостаточной диагностической значимости одного биомаркера необходима разработка панели биомаркеров и на ее основе комплексного классификатора, который позволит различать состояния неоплазий шейки матки с хорошей клинической чувствительностью и специфичностью, а также давать точный прогноз вероятности дальнейшей трансформации эпителия шейки матки. В рамках исследования будет разработан неинвазивный метод ранней диагностики на базе комплексной оценки экспрессии молекулярно-генетических, протеомных и метаболомных биомаркеров цервиковагинальной жидкости (ЦВЖ) с целью прогнозирования пролиферативного потенциала тканей шейки матки у ВПЧ-инфицированных пациенток, в частности у женщин с «малыми» поражениями эпителия шейки. Планируется валидация разработанного неинвазивного метода на группе вакцинированных и невакцинированных женщин в процессе динамического наблюдения; усовершенствование алгоритмов обследования и разработка новых дифференцированных подходов ведения пациенток с неопластической трансформацией эпителия шейки матки, направленных на профилактику злокачественной трансформации тканей. Впервые будет проведено комплексное обследование не менее 200 пациенток с ВПЧ-ассоциированными заболеваниями шейки матки различной степени тяжести, в том числе, с "малыми" поражениями шейки матки с изучением протеомных и метаболомных маркеров ЦВЖ, экспрессии мРНК генов-регуляторов пролиферации, и типа ВПЧ. Протеомный анализ будет включать полуколичественный анализ методом высокоэффективной жидкостной хроматографией с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС) и таргетное определение концентрации панели маркерных белков, в частности, вирусных белков онкогенов Е6 и Е7, методом ИФА. В рамках метаболомного исследования планируется анализ отношения метаболитов эстрадиола 16альфа-ОНЕ1 и 2-ОНЕ1 методом ВЭЖХ-МС/МС. В ходе исследования будет проанализирована экспрессия мРНК генов-регуляторов пролиферации: p16, Ki67, PGR, BCL2, BAG1, BAX, ESRL, COX2, SCUBE2, PTEN, CTSL2,TLR7, OSM. Планируется одномоментное исследование в параллельных группах NILM, LSIL, HSIL, РШМ и динамическое наблюдение прогресса/регресса ВПЧ-ассоциированного цервицита и LSIL, как вакцинированных, так и невакцинированных женщин.По результатам исследования будет создан комплексный классификатор для ранней диагностики и прогнозирования течения предраковых заболеваний шейки матки; определена его диагностическая и прогностическая значимость; разработаны и внедрены в практику ФГБУ НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова Минздрава России клинические рекомендации для ведения пациенток с «малыми» поражениями эпителия шейки (ВПЧ-ассоциированный цервицит и LSIL) по результатам классификатора и у пациенток с предраковыми заболеваниями шейки матки (HSIL). Впервые будут определены особенности течения неопластического процесса на уровне протеома, транскриптома и метаболома клеток эпителия шейки матки при вакцинировании от ВПЧ. Существенным моментом работы является разработка только неинвазивных подходов для диагностики на основе молекулярно-генетических и протеомных исследований ЦВЖ. Внедрение инновационных технологий в практику здравоохранения будет способствовать развитию профилактического направления и дифференцированных подходов к ведению больных с заболеваниями шейки матки.

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Публикации

1. Силачев Д.Н., Горянов К.В., Шпилюк М.А., Безнешенко О.С., Морозова Н.Я., Краевая Е.Е., Попков В.А., Певзнер И.Б., Зорова Л.Д., Евтушенко Е.А., Стародубцева Н.Л., Кононихин А.С., Бугрова А.Е., Евтушенко Е.Г., Плотников Е.Ю., Зоров Д.Б., Сухих Г.Т. Effect of MSCs and MSC-Derived Extracellular Vesicles on Human Blood Coagulation Cells, 8(3), 258 (год публикации - 2019)
10.3390/cells8030258

2. Гусаков К.И., Назарова Н.М., Прилепская В.Н., Стародубцева Н.Л., Франкевич В.Е. Перспективы профилактики рака, ассоциированного с ВПЧ Акушерство и гинекология (год публикации - 2019)

3. Сергеева В.А., Стародубцева Н.Л., Чаговец В.В., Кононихин А.С., Некрасова М.Е., Токарева А.О., Назарова Н.М., Франкевич В.Е. Shortgun lipidomics for differential diagnosis of HPV-associated cervix transformation VIRCHOWS ARCHIV, V. 475: SI1, р.: S86-S87 (год публикации - 2019)

4. Владимир Франкевич; Виталий Чаговец; Алиса Токарева; Наталия Стародубцева; Алексей Кононихин; Константин Чингин; Хуанвэнь Чен и Геннадий Сухих Combination of Low-Temperature Electrosurgical Unit and Extractive Electrospray Ionization Mass Spectrometry for Molecular Profiling and Classification of Tissues Molecules, 24(16), 2957 (год публикации - 2019)
10.3390/molecules24162957

5. Стародубцева Н.Л., Бржозовский А.Г., Кононихин А.С., Бугрова А.Е., Назарова Н.М., Гусаков К.И., Индейкина М.И., Чаговец В.В., Франкевич В.Е., Николаев Е.Н., Сухих Г.Т. Label‐free cervicovaginal fluid proteome profiling reflects the cervix neoplastic transformation Journal of Mass Spectrometry, 54(8):693-703 (год публикации - 2019)
10.1002/jms.4374

6. Алиса Токарева, Виталий Чаговец, Наталья Стародубцева, Низо Назарова, Мария Некрасова, Алексей Кононихин, Владимир Франкевич, Евгений Николаев и Геннадий Сухих Feature selection for OPLS-DA discriminant analysis of cancer tissue lipidomics data Journal of Mass Spectrometry (год публикации - 2019)
10.1002/jms.4457

7. Наталия Стародубцева; Виталий Чаговец; Динара Салимова; Наталья Александрова; Анна Борисова; Константин Чингин; Хуанвэнь Чен; Владимир Франкевич Identification of potential endometriosis biomarkers in peritoneal fluid and blood plasma via shotgun lipidomics Clinical mass spectrometry, Volume 13, Pages 21-26 (год публикации - 2019)
10.1016/j.clinms.2019.05.007

8. Аттоева Д.И., Назарова Н.М., Стародубцева Н.Л., Франкевич В.Е., Чаговец В.В. Липидомные маркеры и перспективы их использования при ВПЧ-ассоциированных заболеваниях шейки матки Акушерство и гинекология, № 11, стр. 40-5 (год публикации - 2019)
10.18565/aig.2019.11.40-45

9. Н.Л. Стародубцева, А. Г. Бржозовский, А.Е. Бугрова, А.С. Кононихин, Гусаков К.И., Н.М. Назарова, В.Е. Франкевич Характеристика динамических изменений протеомного состава цервиковагинальной жидкости при заболеваниях шейки матки, ассоциированных с ВПЧ-инфекцией Акушерство и гинекология, 7: 111-116 (год публикации - 2020)
10.18565/aig.2020.7.111-116

10. Чаговец В.В., Стародубцева Н.Л., Токарева А.О., Некрасова М.Е., Кононихин А.С., Назарова Н.М., Франкевич В.Е. Экспресс-диагностика степени неопластической трансформации шейки матки по молекулярному профилю ткани методом масс-спектрометрии Акушерство и гинекология: новости, мнения, обучение, Т. 8. № 1 (27). С. 109 (год публикации - 2020)

11. Гусаков К.И., Назарова Н.М., Франкевич В.Е., Стародубцева Н.Л., Бурменская О.В., Прилепская В.Н., Сухих Г.Т. Результаты ВПЧ-генотипирования вакцинированных от ВПЧ женщин репродуктивного возраста Акушерство и гинекология, 9: 114-119 (год публикации - 2020)
10.18565/aig.2020.9.114-119

12. Токарева А.О., Чаговец В.В., Кононихин А.С., Стародубцева Н.Л., Николаев Е.Н., Франкевич В.Е. Normalization methods for reducing interbatch effect without quality control samples in liquid chromatography-mass spectrometry-based studies Analytical and Bioanalytical Chemistry (год публикации - 2021)
10.1007/s00216-021-03294-8

13. Юрова М., Стародубцева Н., Гусаков К., Назарова Н., Бугрова А., Бржозовский А., Франкевич В. Changes in the proteome of cervicovaginal fluid during HPV infection in hpv-vaccinated women International Journal of Gynecologic Cancer, Volume 30, Issue Suppl 4 (год публикации - 2020)
10.1136/ijgc-2020-ESGO.32

Публикации