Аннотация результатов, полученных в 2021 году
Известно, что непрерывная нейрогуморальная активация кардиоспленальной оси в условиях ишемии сопровождается длительным поступлением мононуклеарных клеток из селезенки в ткань миокарда, и ассоциируется с неблагоприятным прогнозом и исходами инфаркта миокарда (ИМ) (Swirski, 2009; Heucsh, 2019). Однако подобные данные получены в ходе эксперимента на мышах (Emami, 2015). Целью же нашего исследования послужила оценка особенностей строения селезенки у больных с фатальным ИМ, изучение динамики макрофагальной инфильтрации селезенки и ее взаимоотношений с макрофагальной инфильтрацией сердца и неблагоприятным течением заболевания. В нашей работе в качестве объекта исследования выступали фрагменты селезенок, полученные во время аутопсии у пациентов (n=30), умерших от ИМ I типа в период с 2013 по 2014 гг. Критерии исключения: ИМ II–V типов, онкологические заболевания, инфекционные осложнения (сепсис, пневмония), клапанные пороки, требующие хирургического вмешательства. Исследование проводилось в соответствии с принципами Хельсинкской декларации и было одобрено локальным этическим комитетом (выписка из протокола No 128 от 23.12.2014 г.). Патологоанатомическое вскрытие осуществлялось согласно приказу Министерства здравоохранения Российской Федерации от 6 июня 2013 г. No 354н. Подписание информированного согласия пациентов не проводилось, что не противоречило правилам исследования согласно Хельсинкской декларации («Информированное согласие», пункт 32). Из имеющихся парафиновых блоков (материал, забранный во время проведения аутопсии пациентов, умерших от ИМ 1 типа) с помощью ротационного микротома нами были подготовлены срезы селезенок и нанесены на стекла с L-полилизиновым покрытием. Помимо подготовленных срезов селезенок, для анализа макрофагальной инфильтрации миокарда использовались также ранее подготовленные срезы миокарда. В селезенке были оценены зоны белой и красной пульпы по-отдельности, в миокарде же оценивали инфарктную, пери-инфарктную и отдаленную от ИМ зоны. Макрофагальную инфильтрацию оценивали с использованием иммуногистохимического окрашивания фрагментов селезенок и миокарда с применением антител (стабилин-1, CD68) с последующим подсчётом позитивно окрашенных клеток (моноцитов/макрофагов) в ткани селезенки и миокарда у больных ИМ. Подсчет клеток в селезенке и миокарде производился двумя независимыми исследователями в 10 случайных полях зрения (объектив 40х) на микроскопе Axio Imager M2, Zeiss в светлом поле. Кроме того, нами были проанализированы микро- и макроскопические характеристики селезенки у пациентов с фатальным ИМ. Для оценки макроскопических характеристик нами были изучены протоколы вскрытий, для оценки микроскопических характеристик селезенки часть срезов была окрашена гематоксилин-эозином и оценена с использованием рутинной световой микроскопии. Нами впервые было обнаружено, что размеры селезенки больных с фатальным ИМ были снижены. Отмечалось преобладание красной пульпы с высоким содержанием в ней CD68+ и стабилин-1+ клеток. Белая же пульпа селезенки содержала большое количество средних и мелких фолликулов; количество CD68+ и стабилин-1+ клеток было меньшим, чем в красной пульпе, однако, сопоставимым с таковым в зоне ИМ. Впервые выявлено, что количество CD68+ и стабилин-1+ клеток в миокарде увеличивалось к позднему периоду ИМ. В селезенке, напротив, какая-либо динамика данных клеток отсутствовала. Кроме того, нами впервые установлено, что высокое содержание в красной пульпе CD68+ клеток и, напротив, пониженное содержание стабилин-1+ клеток в белой пульпе ассоциировались с неблагоприятными постинфарктными исходами. Эти фундаментальные открытия могут послужить в последующем основой для разработки новых персонализированных терапевтических и диагностических подходов к лечению ИМ и его осложнений. В ходе выполнения данной работы нами была подготовлена 1 оригинальная статья в журнал "Life" (Q1) "Characteristics of the Cardiosplenic Axis in Patients with Fatal Myocardial Infarction" (https://doi.org/10.3390/life12050673). Материалы работы по гранту были представлены на следующих конференциях: "Всероссийский научно-образовательный форум с международным участием "Кардиология XXI века: альянсы и потенциал", 28-29.04.22, онлайн, Томск, "Форум молодых кардиологов Российского кардиологического общества "От профилактики к высокотехнологичной помощи при сердечно-сосудистых заболеваниях"", 13-14.05.22, Москва.

Аннотация результатов, полученных в 2022 году
Система врожденного иммунитета принимает активное участие в развитии и течении постинфарктной воспалительной реакции (Heusch G., 2019). Своевременное и синхронное поступление воспалительных моноцитов из их физиологического резервуара – селезенки, в зону инфаркта обеспечивает адекватную регенерацию миокарда и, напротив предотвращает развитие затяжной воспалительной реакции, лежащей в основе развития неблагоприятного ремоделирования сердца и последующего формирования, и прогрессирования постинфарктной сердечной недостаточности (Steffens S., 2020). Однако, в настоящий момент вовлеченность кардиоспленальной оси в процесс постинфарктной регенерации миокарда установлена лишь в исследованиях на грызунах, клинических данных, анализирующих макрофагальный состав селезенки и его динамику, связи с исходами и течением заболевания, в условиях ишемии миокарда нет. В ходе выполнения данного этапа работы по гранту нами были изучены особенности макрофагальной инфильтрации функциональных зон селезенки и миокарда, как у лиц с фатальным исходом ИМ, так и у лиц без сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ), определены межклеточные ассоциации, данные между группами сопоставлены. Группу контроля составляли 5 человек, погибшие от травм, несовместимых с жизнью и не имеющих ССЗ. Материалом для исследования послужили фрагменты селезенок (красная (КП) и белая пульпа (БП)) и миокарда, забранные при проведении аутопсии. У лиц с фатальным исходом ИМ в миокарде оценивали инфарктную, пери-инфарктную зону и зону, отдаленную от инфаркта. Также у лиц с ИМ оценивали количество клеток в селезенке и миокарде относительно периода ИМ: в ранний (первые 3-е суток) и отдаленный сроки (до 28 суток от начала заболевания). Макрофагальную инфильтрацию оценивали с помощью иммуногистохимического исследования, проводимого на автоматическом иммуностейнере. Для иммунофенотипирования макрофагов (мф) использовали антитела к общему маркеру мф - CD68, к маркеру М2 мф: CD163, CD206, стабилину-1. Подсчет клеток в селезенке и миокарде производили в 10 случайных полях зрения (объектив 40х) на микроскопе Axio Imager M2, Zeiss в светлом поле. Нами впервые было выявлено, что в обеих функциональных зонах селезенки, как у лиц с ИМ, так и у лиц из контрольной группы, присутствовали все анализируемые нами клетки: CD68+, CD163+, CD206+ и стабилин-1+. Обнаруженное разнообразие макрофагального состава селезенки служит отражением того факта, что селезенка является одним из важнейших периферических органов иммуногенеза у человека. В обеих группах количество всех исследуемых клеток макрофагального ряда в КП превалировало над таковым в БП, что вероятно обусловлено реализацией одной из ведущих функций селезенки, и конкретно КП - фильтрации. Нами впервые было выявлено, что количество исследуемых нами клеток в БП и КП селезенки у лиц с фатальным исходом ИМ не изменялось относительно раннего периода ИМ к отдаленному. В миокарде же, напротив, количество клеток у лиц с ИМ увеличивалось к отдаленному периоду ИМ. Полученные данные могут указывать на неадекватный иммуногенез у лиц с фатальным ИМ, что в свою очередь может быть ассоциировано с неблагоприятным исходом инфаркта. Нами впервые было выявлено, что в БП селезенки у лиц с фатальным исходом ИМ превалировало количество CD68+ клеток, которое в сотни раз превышало таковое в группе контроля, что вероятно обусловлено их воспалительной природой. У лиц без ССЗ преобладали CD163+ клетки. Минимальным в БП в обеих группах было количество CD206+ клеток. В КП у пациентов с ИМ отмечено высокое содержание всех исследуемых нами клеток, кроме CD206+. Содержание CD68+, CD163+, стабилин-1+ клеток в КП селезенки у пациентов с ИМ в разы превышало таковое, как в контрольной группе, так и в БП и инфарктной зоне миокарда у лиц с ИМ. У лиц из контрольной группы в КП преобладали CD163+ клетки, что может быть обусловлено меньшим влиянием ишемии на функциональную активность данного типа клеток. Нами впервые было обнаружено, что по количеству исследуемых нами клеток в селезенке группы были сопоставимы по содержанию CD206+ и CD163+ клеток в БП: 2 (1;5) против 1 (1;2) и 29 (17; 56) против 23 (1; 48) (p<0,05). Возможно, неадекватный генез данных типов клеток в селезенке в ответ на ишемию может обуславливать неблагоприятный исход у лиц с ИМ. Среди всех исследуемых нами типов клеток, единственный тип клеток, содержание которого в селезенке у лиц из контрольной группы превышало таковое у лиц с ИМ - CD206+ в КП (p<0,05); именно содержание клеток данного типа в БП ассоциировалось с их концентрацией в миокарде, как у лиц с ИМ, так и у лиц без ССЗ, характер корреляций был разнонаправленным (p<0,05). Сниженное количество CD206+ клеток в КП и БП селезенки было характерным для больных с фатальным исходом ИМ. Вероятно сниженный иммуногенез, либо функциональная активность в тканях, данного типа клеток в условиях ишемии могут быть связаны с неблагоприятным исходом у лиц с ИМ. Относительно корреляций с клинико-анамнестическими данными у лиц с фатальным исходом ИМ, нами было выявлено, что высокий уровень СD68+ клеток в КП наряду с низкой концентрацией стабилин-1+ клеток в БП был ассоциирован с развитием аневризмы левого желудочка; высокий уровень CD163+ клеток в БП был отмечен у лиц с повторным ИМ. Наше исследование имело ряд ограничений, обусловленных тем, что наша выборка была ограничена по объему; оценивали только данные полученные у лиц с фатальным исходом, не сопоставляя их с данными, полученными у выживших лиц с ИМ. Последующее сопоставление наших результатов с результатами, полученными от пациентов с благополучно разрешившимся ИМ, позволит понять являются ли данные изменения характерными именно для лиц с фатальным ИМ. Полученные нами данные могут лечь в основу разработки новых персонализированных подходов к противовоспалительному лечению осложнений ИМ. Для эффективного воздействия на моноциты и мф при ИМ, вероятно, потребуется найти правильный баланс между двумя его фазами: рекрутированием моноцитов и удалением дебриса провоспалительными мф на первых стадиях и рекрутированием моноцитов и репаративными мф, способствующими заживлению миокарда на более поздних стадиях. Эти фундаментальные открытия могут послужить в последующем основой для разработки новых персонализированных терапевтических и диагностических подходов к лечению ИМ и его осложнений. В ходе выполнения данной работы нами было подготовлено 2 оригинальные статьи: «Место кардиоспленальной оси в развитии фатального исхода инфаркта миокарда» («Российский кардиологический журнал») и «Macrophages of the "heart-spleen" axis and their dynamics in patients with myocardial infarction» («Biomedicines»), статьи запланированы к публикации. Материалы работы по гранту были представлены на следующих конференциях: "Российский национальный кардиологический конгресс 2022" (29.09-1.10.22, г. Казань, устный доклад); «Четвертый Всероссийский научно-образовательный форум с международным участием «Кардиология XXI века: альянсы и потенциал»» (26-28.04.23, г. Томск, устный доклад). Кроме того, данные также были освещены в сети Интернет: https://cardio-tomsk.ru/news/-marta--vsemirnyj-den-immuniteta, https://www.youtube.com/watch?v=ZNNtIaQWmys, https://cardio-tomsk.ru/news/selezjonka-i-infarkt-miokarda-prichinnosledstvennye-svjazi, https://cardio-tomsk.ru/news/uchjonye-nii-kardiologii-issledujut-znachenie-makrofagov-osi-serdceselezenka-v-postinfarktnoj-regeneracii-miokarda