КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Номер 21-15-00029

НазваниеИсследование роли комплексного взаимодействия активированного в потоке фактора фон Виллебранда с тромбоцитами и лейкоцитами в развитии локального воспалительного процесса в сосудистой стенке и тромботических осложнений сердечно-сосудистых заболеваний

РуководительГаббасов Зуфар Ахнафович, Доктор биологических наук

Организация финансирования, регион федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр кардиологии имени академика Е.И. Чазова" Министерства здравоохранения Российской Федерации, г Москва

Период выполнения при поддержке РНФ

2021 г. - 2023 г.

Конкурс№55 - Конкурс 2021 года «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований отдельными научными группами».

Область знания, основной код классификатора 05 - Фундаментальные исследования для медицины, 05-101 - Экспериментальная медицина

Ключевые словафактор фон Виллебранда, гемостаз, тромбоз, адгезия, белки адгезии, рецепторы тромбоцитов, активация тромбоцитов, рекрутинг лейкоцитов, воспаление, контролируемый ток крови, сердечно-сосудистые заболевания

Код ГРНТИ76.03.29

СтатусУспешно завершен

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Аннотация
Адгезия тромбоцитов - важный биологический процесс, как в осуществлении нормального гемостаза, так и в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний. Адгезия тромбоцитов, опосредованная специфическими мембранными рецепторами и адгезивными белками плазмы крови, обеспечивает их первоначальное прикрепление к сосудистой стенке. Существующие на данный момент подходы количественного исследования адгезии тромбоцитов основаны на морфометрическом анализе адгезированных тромбоцитов с помощью методов микроскопии или подсчете количества тромбоцитов до и после контакта с подложкой с использованием меченых (часто радиоактивно) тромбоцитов. Существенным недостатком большинства методик, предназначенных для количественного определения адгезии тромбоцитов, является необходимость проведения исследований в статических условиях при том, что адгезия тромбоцитов существенно зависит от параметров потока. Развитие микрофлюидных технологий и создание принципиально новых биосенсоров представляет собой современный подход, который может обеспечить более информативную и точную оценку параметров адгезии тромбоцитов к поверхностям в условиях потока. Недавно нами был разработан метод анализа в реальном времени кинетики адгезии тромбоцитов к поверхностям с адгезивным белковым покрытием в условиях контролируемого потока (Ю.Н. Автаева и соавт., 2018; Ю.Н.; Автаева и соавт., 2020; патент на изобретение №2725863 «Прибор для регистрации кинетики адгезии тромбоцитов на оптической подложке с адгезивным белковым покрытием» от 06.07.2020 г., см. дополнительные материалы). Тест-система предназначена для исследования клеточного гемостаза путем измерения кинетики адгезии тромбоцитов на оптической подложке в управляемом потоке жидкости, при скорости потока, сопоставимой по своим характеристикам со скоростью кровотока в периферических артериях и артериолах. Скорость потока можно изменять, что позволяет имитировать изменение скорости потока крови в зависимости от диаметра просвета сосуда (например, при наличии стеноза сосуда различной степени выраженности). При повреждении стенки сосуда, циркулирующие тромбоциты первыми из всех клеточных элементов крови связываются с субэндотелиальным матриксом. По этой причине, важно выявление связанных с повреждением регуляторных механизмов активации тромбоцитов и роли белков плазмы крови в осуществлении адгезии тромбоцитов к белковым поверхностям. Используя разработанную нами методику анализа адгезии тромбоцитов, планируется исследовать влияние на адгезию уровня экспрессии на поверхности мембран тромбоцитов гликопротеиновых рецепторов GPIb и GPVI, гликопротеиновых комплексов GPIa/IIa и GPIIb/IIIa. Важным этапом будет исследование роли молекул клеточной адгезии, таких как фибриноген, фибронектин и фактор фон Виллебранда (ФВ), в адгезии тромбоцитов. ФВ - это крупный мультимерный гликопротеин, присутствующий в системе кровообращения, эндотелиальных клетках, мегакариоцитах, тромбоцитах и соединительной ткани. ФВ критически важен для осуществления нормального гемостаза. Также ФВ связывает и защищает от деградации фактор свертывания крови VIII, который без этой защиты быстро выводится из кровообращения. Schneider S.W. и соавт. (2007 г.) показали, что мультимеры ФВ способны к гидродинамической активации и многократно увеличивают свои гемостатические свойства при скоростях сдвига выше 5000/с. Такие скорости сдвига характерны для мест сосудистой травмы и стенозирования сосудов (например, в результате атеросклеротического процесса). Авторы обнаружили, что ФВ обратимо изменяет конформацию с глобулярной на фибриллярную при скорости сдвига выше критической даже при отсутствии адгезивной поверхности (см. дополнительные материалы). Таким образом, в статических условиях или условиях с низкими скоростями сдвига ключевая роль в адгезии тромбоцитов принадлежит фибриногену. При скоростях сдвига выше критических на первый план выходит влияние на адгезию тромбоцитов фактора фон Виллебранда. При активации и разворачивании мультимеров ФВ открываются многочисленные места связывания с рецепторами тромбоцитов (GP Ib и GP IIb/IIIa), лейкоцитов (PSGL-1 и β2-интегрины), коллагенами I, III и IV типов, фибриногеном (см. дополнительные материалы). Zhang с соавт. (2019 г.) показали, что активированные мультимеры ФВ способны связываться друг с другом, образуя очень длинные нити и паутинообразные структуры, значительно повышая активность во взаимодействии с тромбоцитами и лейкоцитами. ФВ играет важную роль в рекрутинге лейкоцитов при высоких скоростях сдвига. Bernardo A. с соавт. (2005 г.) показали, что при высоких скоростях сдвига в отсутствие ФВ лейкоциты неспособны прочно связываться с эндотелием. Адгезировавший к поврежденному эндотелию ФВ и связанные с ним тромбоциты, экспрессирующие Р-селектин, необходимы для рекрутинга лейкоцитов при высоких скоростях сдвига и их последующей экстравазации. Важное значение ФВ в рекрутинге и экстравазации лейкоцитов в зону локального воспаления, в том числе при инфаркте миокарда, показано в ряде in vivo исследований (см. обзор Gragnano F. с соавт., 2017 г.). В связи с ключевой ролью ФВ в обеспечении гемостаза и рекрутинге лейкоцитов, один из этапов исследования будет посвящен изучению влияния активации фактора фон Виллебранда сдвиговыми напряжениями тока крови на степень и кинетику адгезии тромбоцитов и лейкоцитов на различные реакционные поверхности. Это будут фибриноген, фибриллярные коллагены I, II, III типов, нефибриллярный коллаген IV типа, фибронектин. Исследование планируется проводить в большом диапазоне контролируемых скоростей сдвига (от 500/с до 10 000/с). Роль ФВ, содержащегося в α-гранулах тромбоцитов, остаётся недостаточно изученной. Verhenne с соавт., 2015 г. показали, что тромбоцитарный ФВ не имеет значения для обеспечения первичного гемостаза, однако играет существенную роль в развитии ишемического инсульта. Кроме того, остаётся неизученным вклад ФВ тромбоцитарных α-гранул в образование локальных паутинообразных структур ФВ, необходимых для рекрутинга лейкоцитов при высоких скоростях сдвига. В связи с этим, планируется проведение исследования кинетики клеточной адгезии на адгезивные белковые поверхности при высоких скоростях сдвига в сочетании с электронной и флуоресцентной микроскопией белковых поверхностей после перфузии цельной крови мышей, дефицитных по ФВ плазмы крови и/или ФВ тромбоцитов. Развитие новых высокоинформативных методов диагностики позволит разработать эффективные способы профилактики и лечения сердечно-сосудистых, онкологических и гематологических заболеваний, при которых неконтролируемые нарушения взаимодействия тромбоцитов с сосудистой стенкой могут приводить к развитию у пациентов неблагоприятных событий, таких как инфаркты органов и тканей, нарушения мозгового кровообращения, тромбоцитопении, большие и малые кровотечения и т.д. Запланированные в ходе реализации проекта результаты по своей научной новизне и значимости будут соответствовать, а в методическом плане превосходить современный мировой уровень исследований. Первичная и вторичная профилактика заболеваний, обусловленных атеросклеротическим поражением артерий, во многом осуществляется посредством воздействия на общепризнанные факторы риска развития атеросклероза. Однако даже адекватный контроль этих факторов не позволяет предотвратить прогрессирование заболеваний и развитие осложнений. В связи с этим чрезвычайно актуальным является обнаружение иных факторов, способствующих возникновению и прогрессированию атеросклероза, особенно тех факторов, на которые можно было бы воздействовать с целью снижения заболеваемости и смертности. В последние годы появляется все больше свидетельств того, что адгезия тромбоцитов и рекрутинг лейкоцитов, опосредованные фактором фон Виллебранда, вносят вклад в развитие сердечно-сосудистых заболеваний и их осложнений. Однако работы по изучению подобной связи немногочисленны, что во многом связано с отсутствием оборудования, которое адекватно оценивает клеточную адгезию в потоке. Привлекательной моделью для изучения значимости клеточной адгезии в развитии сердечно-сосудистой патологии является ишемическая болезнь сердца (ИБС) у пациентов с «преждевременным» развитием заболевания (мужчины до 45 лет и женщины до 55 лет) в отсутствие или при малом числе основных факторов риска. В этом случае связь между повышенной клеточной адгезией, опосредованной ФВ, и возникновением ИБС будет более убедительной. Целью планируемого исследования является оценка связи между опосредованной ФВ адгезией тромбоцитов, рекрутингом лейкоцитов и ранним возникновением ИБС. В исследование планируется включить мужчин в возрасте до 45 лет и женщин в возрасте до 55 лет с документированной посредством коронароангиографии ИБС, в том числе перенесенным инфарктом миокарда. Планируется изучение связи между адгезией тромбоцитов и рекрутингом лейкоцитов, опосредованных ФВ, и возникновением ИБС; между адгезией тромбоцитов и рекрутингом лейкоцитов, опосредованных ФВ, и тяжестью поражения коронарных артерий; оценка влияния общепризнанных факторов риска ИБС на адгезию тромбоцитов и рекрутинг лейкоцитов, опосредованных ФВ; влияние адгезии тромбоцитов и рекрутинга лейкоцитов, опосредованных ФВ, на прогрессирование атеросклероза. В качестве контроля будут служить пациенты аналогичного возраста, у которых ИБС исключена на основании данных коронароангиографии и нагрузочных тестов.

Ожидаемые результаты
Мы ожидаем, что в результате проведенных исследований будут получены следующие основные результаты: 1) Получены новые данные о параметрах адгезии тромбоцитов в цельной крови в условиях контролируемого потока. Выявлены механизмы усиления активности взаимодействия тромбоцитов с белковой поверхностью за счет увеличения в цельной крови пристеночной скорости сдвига; за счет скопления (margination) тромбоцитов в пристеночной области из-за "выдавливания" тромбоцитов из центра потока более крупными клетками (эритроцитами); за счет увеличения количества рецепторов фактора фон Виллебранда, вовлеченных в адгезию тромбоцитов к реакционной белковой поверхности, при высоких скоростях сдвига. 2) Будет изучена кинетика и механизмы адгезии тромбоцитов на различные реакционные поверхности (фибриноген, фибронектин, фибриллярные коллагены I, II, III типов, нефибриллярный коллаген IV типа). 3) Изучена роль активации фактора фон Виллебранда при скоростях сдвига выше критической в адгезии тромбоцитов на реакционную поверхность. Проведен анализ параметров адгезии тромбоцитов на реакционную поверхность методами оптической, электронной, флуоресцентной микроскопии. 4) Изучена роль различных рецепторов тромбоцитов в их адгезии на белковую поверхность в условиях потока. А именно, рецепторов фактора фон Виллебранда (GPIb и GPIIb/IIIa), рецепторов коллагена (GPIa/IIa и GPVI), рецепторов фибриногена (GPIb и GPIIb/IIIa). 5) Исследована роль гликопротеиновых рецепторов тромбоцитов в адгезии на различные реакционные поверхности при скоростях сдвига ниже и выше критической (5000/с). 6) Исследованы параметры адгезии тромбоцитов на различные реакционные поверхности в условиях контролируемого потока у здоровых добровольцев и больных ИБС при низких и высоких скоростях сдвига (1000/с и 10 000/с). 7) Определена доля вклада GPIb (рецептора фактора фон Виллебранда) и GPIIb/IIIa (рецептора фибриногена и фактора фон Виллебранда) в адгезию тромбоцитов у здоровых добровольцев и пациентов с ИБС в условиях низких и высоких скоростях сдвига. 8) Определен вклад фактора фон Виллебранда плазмы крови и тромбоцитарных α-гранул в формирование адгезирующих паутинообразных структур фактора фон Виллебранда, опосредующих рекрутинг лейкоцитов. 9) Изучены механизмы опосредованного фактором фон Виллебранда рекрутинга лейкоцитов в цельной крови при высоких скоростях сдвига. Полученные результаты планируется использовать в медицине и здравоохранении для повышения информативности и точности диагностики, а также, контроля эффективности лечения сердечно-сосудистых, онкологических и гематологических заболеваний при которых отмечаются нарушения комплексного взаимодействия активированного фактора фон Виллебранда, тромбоцитов и лейкоцитов с сосудистой стенкой. Новые технологии в диагностике состояния клеточного гемостаза, которые позволят получать новые данные о нарушениях адгезивной активности тромбоцитов и позволят контролировать эффективность лечения, будут способствовать снижению у пациентов частоты неблагоприятных событий и, как следствие, уменьшению количества безвозвратных потерь от социально значимых заболеваний.

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Аннотация результатов, полученных в 2021 году
В результате проведенных в 2021 году работ было обнаружено значительное усиление интенсивности и степени адгезии тромбоцитов к поверхностям фибриногена и коллагена, которые регистрировались по увеличению интенсивности рассеянного лазерного излучения при протекании цельной крови через проточную камеру по сравнению с обогащенной тромбоцитами плазмы крови (ОТП). В ОТП и цельной крови блокирование GP IIb/IIIa, тромбоцитарного рецептора к фибриногену, путем добавления моноклональных антител приводило к ингибированию адгезии тромбоцитов и соответствующему ингибированию изменений интенсивности оптического сигнала. Эти изменения должным образом отражают адгезию тромбоцитов на покрытую фибриногеном оптическую поверхность камеры, а также зависимость адгезии от связывания фибриногена с его специфическими рецепторами на поверхности тромбоцитов. Таким образом, можно утверждать, что изменения интенсивности регистрируемого оптического сигнала адекватно отражают процесс адгезии тромбоцитов к поверхности, покрытой фибриногеном. Кроме того, получены новые данные о параметрах адгезии тромбоцитов в цельной крови в условиях контролируемого потока. Выявлены механизмы усиления активности взаимодействия тромбоцитов с белковой поверхностью за счет увеличения в цельной крови пристеночной скорости сдвига; за счет скопления (margination) тромбоцитов в пристеночной области из-за "выдавливания" тромбоцитов из центра потока более крупными клетками (эритроцитами); за счет увеличения при высоких скоростях сдвига количества рецепторов фактора фон Виллебранда, вовлеченных в адгезию тромбоцитов к реакционной белковой поверхности. Исследована кинетика адгезии тромбоцитов на различные реакционные белковые поверхности (фибриноген, фибриллярные и нефибриллярный коллагены, фибронектин). Выяснилось, что при использовании в качестве антикоагулянта 3.2% цитрата натрия, адгезия на реакционные поверхности наблюдается только на поверхность, покрытую фибриногеном. Поверхности коллагена, фибронектина и ламинина не обладают сколь либо выраженными адгезивными свойствами в цельной крови в условиях тока крови со скоростями, которые обеспечивают значения пристеночной скорости сдвига порядка 1000 – 2000 с-1. По результатам этого этапа исследований мы пришли к выводу, что в случае исследований взаимодействия клеток крови в условиях потока к фибриногену мы будем использовать в качестве атикоагулянта 3.2% цитрат натрия, во всех других случаях – пептид PPACK. Обнаружились некоторые ограничения этого решения. Во-первых, пептид не производится у нас в стране и является довольно дорогим препаратом, во-вторых, были обнаружены некоторые ограничения во времени хранения образцов крови после взятия. Все эксперименты необходимо заканчивать не позднее 2-х часов после получения крови. При использовании PPACK в качестве антикоагулянта через 2 часа наблюдается резкое снижение функциональной активности клеток крови и, как следствие, снижение адгезивных свойств до полного их исчезновения через 2.5-3 часа после взятия крови. Эксперименты показали, что интенсивность адгезии клеток крови к реакционной поверхности очень сильно зависит от скорости тока крови. Нами получены данные о зависимости кинетики адгезии тромбоцитов к покрытой коллагеном 1-го типа поверхности в условиях потока в образцах цельной крови одного и того же здорового субъекта в случае использования в качестве антикоагулянта 100мМ PPACK при разных скоростях сдвига, которая обеспечивает создание пристеночной скорости сдвига в интервале от 900 до 9500 сек-1. Обнаружено, что степень и скорость адгезии очень сильно зависят от скорости тока крови. Вначале, при возрастании скорости тока адгезия ускоряется. Затем, при очень высокой скорости – активность адгезии снижается. При этом, такая сложная зависимость сохраняется и на других видах покрытия, например, фибриноген и использование в качестве антикоагулянта цитрата натрия. Одновременно, важно отметить, что в этих экспериментах мы исследовали кровь здоровых молодых добровольцев. Предварительные опыты показали, что с возрастом, а также, у больных ИБС картина меняется. Интенсивность адгезии клеток на белковые поверхности во многих случаях растет с увеличением скорости тока крови. Изучена роль в адгезии тромбоцитов на реакционную белковую поверхность активации фактора фон Виллебранда при скоростях сдвига выше критической. Исследована роль тромбоцитарных рецепторов GP Ib и GP IIb/IIIa в обеспечении ФВ-опосредованного рекрутинга лейкоцитов при высоких скоростях сдвига. Проведены контрольные исследования параметров адгезии тромбоцитов и лейкоцитов на реакционную поверхность методами оптической и флуоресцентной микроскопии. Было выявлено, что два тромбоцитарных гликопротеиновых комплекса, GP Ib и GP IIb/IIIa, опосредуют адгезию тромбоцитов в крови в условиях высоких скоростей потока. Переход от фибриноген-опосредованной к опосредованной фактором Виллебранда адгезии тромбоцитов к фибриногену может быть продемонстрирован с помощью нашей тест-системы при сравнении результатов, полученных в ОТП и цельной крови. Мы показали, что адгезия тромбоцитов в цельной крови при артериальных скоростях сдвига зависит от связывания тромбоцитов с фактором фон Виллебранда через рецептор GPIb, а блокирование рецептора GPIIb / IIIa практически полностью ингибирует адгезию. С применением разработанной нами методики диагностики нарушений клеточного гемостаза была оценена кинетика адгезии клеток крови к фибриногену в цельной крови пациентов с новой коронавирусной инфекцией (COVID-19). Так же у этих пациентов был оценен вклад взаимодействия GP Ib рецепторов тромбоцитов и ФВ в адгезию клеток крови к фибриногену при скоростях сдвига, соответствующих току крови в артериальном русле. Мы обнаружили, что блокирование взаимодействия GP Ib рецепторов тромбоцитов и фактора вон Виллебранда (ФВ) приводило к подавлению адгезии клеток крови на 63,9 % (47,5; 83,8)%, в то время как у здоровых добровольцев этот уровень составлял всего 18,3 % (5,8; 43,4)%, p<0.001, непараметрический U-критерий Манна-Уитни. Это говорит об очень высоком вкладе ФВ в адгезию клеток к белковой поверхности при COVID-19. В настоящее время методы стратификации риска обусловленных активацией ФВ тромботических осложнений и определения пациентов, которым показана терапия, направленная на предотвращение обусловленных ФВ тромботических осложнений, в настоящее время не разработаны. Такие методы должны основываться на определении степени активации ФВ в потоке, поскольку именно активация в потоке, а не концентрация в крови, отражают активность ФВ у обследуемых пациентов. Таким образом, наши данные говорят о существенном повышении вклада ФВ в адгезию клеток крови к белковым поверхностям в условиях высоких скоростей тока крови, которые характерны для сосудов артериального русла. Разработанная нами методика исследования параметров адгезии клеток в условиях контролируемого тока крови может позволить определить клиническое значение выявляемой повышенной активации ФВ в потоке в развитии тромботических осложнений новой коронавирусной инфекции.

Публикации

1. Габбасов З.A., Автаева Ю.Н., Мельников И.С., Охота С.Д., Капринда М., Мозес И., Просекка Р., Родриго Л., Крузлак П., Зозуля Н.И. Kinetics of platelet adhesion to a fibrinogen-coated surface in whole blood under flow conditions Journal of Clinical Laboratory Analysis, 2021 Sep; 35(9): e23939 (год публикации - 2021) https://doi.org/10.1002/jcla.23939

2. Зверева М.Д., Мельников И.С., Сабурова О.С., Козлов С.Г., Габбасов З.А. МОНОМЕРНЫЙ С-РЕАКТИВНЫЙ БЕЛОК У ПАЦИЕНТОВ С КАРОТИДНЫМ АТЕРОСКЛЕРОЗОМ Комплексные проблемы сердечно-сосудистых заболеваний, 2021, том 10, №2, С. 142 (год публикации - 2021)

3. Габбасов З. А., Автаева Ю. Н., Мельников И. С. Проточный блок устройства для диагностики нарушений клеточного гемостаза -, заявка на патент №2021131310 (год публикации - )

4. - НОВОЕ МИКРОУСТРОЙСТВО ПОМОЖЕТ ВЫЯВЛЯТЬ РИСКИ ТРОМБОЗА В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ Научная Россия, 19.08.2021 14:30 (год публикации - )

5. - Новое устройство российских ученых поможет выявлять риски тромбоза в реальном времени Федеральное Агентство Новостей, - (год публикации - )

6. - Создано устройство, отслеживающее формирование тромбов в реальном времени Газету.Ru, - (год публикации - )

Аннотация результатов, полученных в 2022 году
В результате реализации проекта в 2022 году получены новые данные о строении белкового тромба, который образуется в результате адгезии тромбоцитов к покрытой коллагеном 1-го типа поверхности в условиях высоких скоростей тока крови. Методами электрофореза в полиакриламидном геле и масс-спектроскопии в образовавшихся в пристеночной области белковых структурах обнаружены миозин 9, филамин А, тропомиозин А4 и актин В, которые являются сократительными белками и белками цитоскелета клеточных элементов. Это может означать наличие в исследуемых образцах большого количества клеток крови, а именно, тромбоцитов и лейкоцитов. В связи с этим, мы особое внимание уделили дальнейшему исследованию образующихся пристеночных структур методами флуоресцентной микроскопии. Анализ флуоресценции последовательных плоских срезов, находящихся друг от друга на расстоянии 5 мкм от покрытой коллагеном поверхности камеры (флуоресцентный инвертированный микроскоп Nikon Ti2), показал, что высота белковых пристеночных образований составляет 50-70 мкм и они обогащены тромбоцитами и лейкоцитами. Мы полагаем, что способность ФВ образовывать области, подобные паутине, позволяет ему служить субстратом для активного рекрутирования лейкоцитов для их последующей экстравазации в поврежденную область при высоких скоростях сдвига, при которых одни лейкоциты не могут прочно адгезировать к стенке сосуда. Активное, кооперативное участие ФВ и тромбоцитов в рекрутировании лейкоцитов и их последующей экстравазации может быть важным механизмом развития локального воспалительного процесса в местах повреждения сосудов и разрыва атеросклеротической бляшки при высоких скоростях сдвига, характерных для сосудов артериального русла. Мы обнаружили значительное различие в степени ингибирования степени адгезии после добавления мАт к GPIb тромбоцитов у больных с преждевременной ИБС и у пациентов без этого заболевания. У больных с преждевременной ИБС степень ингибирования адгезии в среднем составляла 75%, в то время как, у пациентов без этого заболевания – на 9% (p <0,0001). Таким образом, можно предположить больший «вклад» взаимодействия ФВ с рецепторами GPIb тромбоцитов в пристеночное тромбообразование у больных с преждевременной ИБС. Согласно проведенному ROC-анализу оптимальное сочетание чувствительности и специфичности в прогнозировании возникновения преждевременной ИБС, равное, соответственно, 90% и 73%, достигается при отрезном значении величины ингибирования адгезии равном 42%. Можно полагать, что снижение адгезии тромбоцитов на 42,8% и более к коллагеновой поверхности в условиях высоких скоростей сдвига при блокировании мАт взаимодействия ФВ с GPIb тромбоцитов стойко ассоциировались с преждевременной ИБС. Величина вклада взаимодействия рецепторов GPIb с ФВ в адгезию тромбоцитов при высоких скоростях сдвига может быть прямо связана с преждевременным развитием ИБС. По результатам работы получен патент №2764701, дата регистрации 19.01.2022, «Проточный блок устройства для диагностики нарушений клеточного гемостаза», В 2022 году Автаевой Ю.Н. успешно защищена диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по теме «Взаимодействие клеток крови с адгезивной белковой поверхностью в условиях контролируемого потока и разработка методики диагностики нарушений клеточного гемостаза на основе микрофлюидной технологии».

Публикации

1. Автаева Ю.Н., Мельников И.С., Имаев Т.Э., Комлев А.Е., Габбасов З.А. Опосредованная взаимодействием фактора фон Виллебранда и гликопротеина Ib адгезия тромбоцитов у больных с тяжелым стенозом аортального клапана КЛИНИЧЕСКАЯ ГЕРОНТОЛОГИЯ, 2023;29(1-2):41-46. (год публикации - 2023) https://doi.org/10.26347/1607-2499202301-02041-046

2. Автаева Ю.Н., Мельников И.С., Калинская А.И., Васильева Е.Ю., Габбасов З.А. ВКЛАД ФАКТОРА ФОН ВИЛЛЕБРАНДА В АДГЕЗИЮ КЛЕТОК КРОВИ К ФИБРИНОГЕНУ В УСЛОВИЯХ ПОТОКА У ПАЦИЕНТОВ С ТЯЖЕЛЫМ ТЕЧЕНИЕМ COVID-19 Сборник материалов VI межрегиональной научно-практической конференции. Саратов, 2022. Издательство "Саратовский источник" (Саратов), Сборник материалов VI межрегиональной научно-практической конференции. Саратов, 2022. Издательство: Издательство "Саратовский источник" (Саратов) (год публикации - 2022)

3. Мельников И.С., Козлов С.Г., Погорелова О.А., Трипотень М.И., Хамчиева Л.Ш., Сабурова О.С., Автаева Ю.Н., Зверева М.Д., Матрозе Е.Г., Кузнецова Т.В., Прокофьева Л.В., Балахонова Т.В., Габбасов З.А. The monomeric C-reactive protein level is associated with the increase in carotid plaque number in patients with subclinical carotid atherosclerosis Frontiers in Cardiovascular Medicine, Front. Cardiovasc. Med., 22 July 2022 Sec. Atherosclerosis and Vascular Medicine https://doi.org/10.3389/fcvm.2022.968267 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.3389/fcvm.2022.968267

4. Габбасов З. А., Автаева Ю. Н., Мельников И. С. Проточный блок устройства для диагностики нарушений клеточного гемостаза -, 2764701 (год публикации - )

Аннотация результатов, полученных в 2023 году
В ходе выполнения работ в отчетном периоде были достигнуты следующие результаты. Было продемонстрировано, что образующийся в цельной крови при высоких скоростях потока пристеночный тромб содержит значительное количество фактора фон Виллебранда (ФВ). ФВ-положительные белковые структуры пристеночного тромба были колокализованы с тромбоцитами. Пристеночный тромб также был инфильтрирован лейкоцитами. Вклад взаимодействия ФВ с GPIb рецепторами тромбоцитов был выше у пациентов с ишемической болезнью сердца (ИБС). С поправкой на традиционные факторы риска ИБС, отношение шансов наличия ИБС у пациентов со снижением опосредованной взаимодействием ФВ и GPIb адгезии тромбоцитов ≥62% составило 5,2, (95% ДИ 2,1-12,6, p <0,001). Плазменные уровни ФВ были выше у пациентов контрольной группы и у пациентов с артериальной гипертензией (p=0,03 и p=0,04), однако связи плазменных уровней ФВ с выраженностью адгезии тромбоцитов до и после добавления мАт к GPIb обнаружено не было. Ристоцетин-кофакторная активность ФВ у пациентов с ранним развитием ИБС и без ИБС не различалась (p = 0.31). Было продемонстрировано, что у пациентов с тяжелым аортальным стенозом вклад взаимодействия ФВ и GPIb в адгезию тромбоцитов незначителен, в то время как уровни ФВ существенно повышены. Гидродинамическая активация ФВ и последующая его инактивация металлопротеиназой ADAMTS13 при характерных для больных с АС высоких скоростях тока крови в устье аорты может приводить к функциональной недостаточности ФВ, что проявляется снижением вклада взаимодействия ФВ с GPIb в адгезию тромбоцитов в потоке. Результатом такого приобретенного нарушения функции ФВ (синдром Виллебранда 2А типа) может приводить к развитию желудочно-кишечных кровотечений при тяжелом АС (синдромом Хейде). Важно отметить, что у шести обследованных нами пациентов с тяжелым АС был диагностирован синдром Хейде.

Публикации

1. Охота С.Д., Козлов С.Г., Автаева Ю.Н., Мельников И.С., Гурия К.Г., Габбасов З.А. Адгезия тромбоцитов, опосредованная фактором фон Виллебранда, у пациентов с ранним развитием ишемической болезни сердца Атеросклероз и Дислипидемии, Атеросклероз и дислипидемии. 2023;2(51):54-64 (год публикации - 2023) https://doi.org/10.34687/2219-8202.JAD.2023.02.0006

2. Охота С.Д., Козлов С.Г., Автаева Ю.Н., Мельников И.С., Сабурова О.С., Гурия К.Г., Матрозе Е.Г., Габбасов З.А. Platelet Adhesion Mediated by von Willebrand Factor at High Shear Rates Is Associated with Premature Coronary Artery Disease Biomedicines, Biomedicines 2023, 11, 1916. (год публикации - 2023) https://doi.org/10.3390/biomedicines11071916

3. Автаева Ю.Н., Мельников И.С., Васильев С.А., Габбасов З.А. Роль фактора фон Виллебранда в патологии гемостаза Атеротромбоз, 2022;12(2):79–102. (год публикации - 2023) https://doi.org/10.21518/2307-1109-2022-12-2-79-102

4. Автаева Ю.Н., Гурия К.Г., Мельников И.С., Калинская А.И., Артемьева Г.А., Габбасов З.А. РОЛЬ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФАКТОРА ФОН ВИЛЛЕБРАНДА И GPIB ТРОМБОЦИТОВ В АДГЕЗИИ КЛЕТОК КРОВИ К ФИБРИНОГЕНУ В ПОТОКЕ У ПАЦИЕНТОВ С ТЯЖЕЛЫМ ТЕЧЕНИЕМ COVID-19 Тезисы в сборнике Российский национальный конгресс кардиологов 2023: 474., Тезисы в сборнике Российский национальный конгресс кардиологов 2023: 474. (год публикации - 2023)

5. Охота С.Д., Козлов С.Г., Автаева Ю.Н., Мельников И.С., Сабурова О.С., Гурия К.Г., Прокофьева Л.В., Габбасов З.А. Чрезмерная адгезия тромбоцитов, опосредованная фактором фон Виллебранда, у пациентов с преждевременной ишемической болезнью сердца Тезисы в сборнике Российский национальный конгресс кардиологов 2023: 372., Тезисы в сборнике Российский национальный конгресс кардиологов 2023: 372. (год публикации - 2023)

Возможность практического использования результатов
Результаты проекта могут найти применение в оценке состояния системы гемостаза при ряде заболеваний, связанных с тромботическими осложнениями или кровотечениями, таких как ишемическая болезнь сердца, криптогенный ишемический инсульт, новая коронавирусная инфекция, тяжелый аортальный стеноз, синдром Хейде, патологии системы гемостаза.