КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

 

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ

Номер 18-14-00140

НазваниеОптимизация процессов биоконверсии нефтесодержащих отходов на основе непатогенных актинобактерий и биосурфактантов

РуководительКуюкина Мария Станиславовна, Доктор биологических наук

Организация финансирования, регион Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Пермский государственный национальный исследовательский университет", Пермский край

Период выполнения при поддержке РНФ 2021 г. - 2022 г. 

Конкурс Конкурс на продление сроков выполнения проектов, поддержанных грантами Российского научного фонда по приоритетному направлению деятельности Российского научного фонда «Проведение фундаментальных научных исследований и поисковых научных исследований отдельными научными группами» (28).

Область знания, основной код классификатора 04 - Биология и науки о жизни, 04-110 - Общая и молекулярная микробиология; вирусология

Ключевые словаБиоконверсия, нефтесодержащие отходы, непатогенные актинобактерии, иммобилизованные клетки, биосурфактанты, биотрансформация

Код ГРНТИ34.27.39

СтатусУспешно завершен

 

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ

Аннотация
Цель поискового исследования – оптимизация процессов микробной конверсии нефтесодержащих отходов на основе непатогенных актинобактерий рода Rhodococcus и синтезируемых ими биосурфактантов, обеспечивающей получение, помимо очищенных воды и грунта, новых биотехнологических продуктов (ферментов, биосурфактантов, биологически активных веществ, прекурсоров для тонкого органического синтеза и фармацевтической промышленности). Это новое направление экологической биотехнологии, постепенно завоевывающее позиции нефтехимии и призванное решить проблему экологически безопасной утилизации отходов нефтедобывающей и перерабатывающей отрасли в сочетании с получением ценных биотехнологических продуктов. В ходе выполнения проекта будут решаться задачи оптимизации процессов биоконверсии углеводородных соединений (ПАУ, стеранов, нефтяных кислот, N,O,S-содержащих гетероциклов) в экстремальных условиях внешней среды (при низких температурах, высоком содержании органических токсикантов и солей тяжелых металлов, повышенной кислотности и засоленности). Исследование кинетики и оптимизация процессов бактериальной трансформации наиболее токсичных и высокоустойчивых компонентов нефти позволит оценить возможности их биодеструкции в ходе очистки нефтезагрязненной воды и грунта, а также биоконверсии данных соединений в практически ценные окисленные продукты с потенциальной биологической активностью. Предлагаемый инновационный подход к решению данной проблемы заключается в использовании иммобилизованных на органических носителях клеток родококков с индуцированным оксидоредуктазным ферментным комплексом, функционализации клеточной поверхности для повышения сродства к углеводородным субстратам, а также генетического инжиниринга отобранных штаммов с целью повышения их каталитической активности и стрессоустойчивости. Будет исследована возможность получения из нефтеотходов не только новых органических компонентов, но и извлечения металлов путем их биовосстановления в клетках родококков и комплексообразования с биосурфактантами. В рамках внедренческой части проекта будет реализована идея «обмена отходами – обмена ресурсами», когда отходы сельского хозяйства используются для утилизации отходов нефтяной промышленности. Данный подход предусматривает использование непищевых отходов птицефабрик (птичий помет, подстилка, перо) для биологической утилизации нефтесодержащих отходов (твердых и жидких нефтешламов). Будут решаться проблемы безопасного использования отходов птицефабрик, в частности предотвращения загрязнения окружающей среды антибиотиками и другими лекарственными веществами с помощью деградационного потенциала родококков. Реализация результатов проекта будет способствовать снижению экологического напряжения вследствие уменьшения объема накапливаемых отходов в двух ведущих промышленном и аграрном секторах РФ – нефтяной отрасли и птицеводстве. Полученные результаты будут востребованы при создании промышленных технологий переработки нефтесодержащих отходов.

Ожидаемые результаты
В ходе выполнения проекта будут получены новые фундаментальные данные и технические результаты по оптимизации процесса биоконверсии нефтесодержащих отходов, направленные на снижение экологического риска от воздействия нефтяного загрязнения. Будут разработаны инновационные методы биоремедиации загрязненных почвы и грунта, основанные на применении биогенных сурфактантов и иммобилизованных клеток углеводородокисляющих актинобактерий рода Rhodococcus. Будет исследована кинетика и решены задачи оптимизации процессов биоконверсии родококками наиболее стойких и токсичных углеводородных соединений (ПАУ, стеранов, нефтяных кислот, N,O,S-содержащих гетероциклов), что позволит оценить возможности их биодеструкции в ходе очистки нефтезагрязненных воды и почвы, а также биоконверсии в практически ценные окисленные продукты с потенциальной биологической активностью. Будет проведено исследование химической структуры, физико-химических и биологически-активных свойств продуктов биотрансформации углеводородных соединений, оценена их токсичность и экологическая безопасность. Полученные результаты исследования механизмов биоконверсии углеводородсодержащих ксенобиотиков будут способствовать расширению познания комплексных процессов восстановления нарушенных и загрязненных углеводородами природных экосистем. На основе секвенированных нами геномов штаммов родококков, активных биодеструкторов (в частности R. ruber ИЭГМ 231, R. erythropolis ИЭГМ 267 и новых секвенированных геномов 2-3 штаммов) будет создана библиотека наиболее перспективных функциональных генов родококков (метан/пропанмонооксигеназ, алкан-монооксигеназ, цитохромов Р450, лакказ, диоксигеназ, дегидрогеназ, и др.), полезных для биоконверсии углеводородных загрязнителей, и обоснована стратегия метаболического инжиниринга штаммов-продуцентов. В частности, будет проведено клонирование обнаруженных ранее последовательностей лакказных генов WP_040273258.1 и WP_082061313.1 с характерными доменами (CuRO_1_Tth-MCO_like и CuRO_3_Tth-MCO_like) с целью оценки их экспрессии в зависимости от ионов меди в среде. Будут также изучены функциональные характеристики лакказ выбранных коллекционных штаммов родококков (3-5 штаммов) в целых клетках и ферментных препаратах. Конечным результатом будет получение новых бактериальных лакказ, обладающих такими преимуществами перед грибными лакказами, как активность в щелочном диапазоне кислотности среды, устойчивость к повышенным температурам и широкая субстратная специфичность. Будут получены новые данные по механизмам устойчивости родококков к действию экстремальных факторов среды, в частности нефтяных углеводородов и их производных, наночастиц тяжелых металлов. Морфометрические и наномеханические характеристики живых и мертвых клеток родококков под воздействием токсичных ксенобиотиков планируется исследовать с использованием комбинированной системы сканирования, состоящей из атомно-силового микроскопа Asylum MFP-3D-BIO (Asylum Research, США) и конфокального лазерного микроскопа (Olympus, Германия), динамику электрокинетического потенциала клеток – методом динамического светорассеивания с помощью анализатора ZetaSizer Nano ZS (Malvern Instruments, Великобритания), а физиологические свойства бактериальных клеток будут оценены по динамике дыхательной активности, измеренной на респирометре непрямого замкнутого цикла Micro-Oxymax® (Columbus Instruments, США). Также планируется продолжить изучение роли эффлюксных насосов в устойчивости родококков к нефтяным углеводородам и тяжелым металлам, которое будет проведено с использованием различного типа ингибиторов эффлюкса. Перспективными продуктами биотрансформации углеводородов родококками являются гликолипидные (трегалолипидные) биосурфактанты, обладающие выраженной межфазной, эмульгирующей, десорбирующей и биологической активностью. Планируется продолжить исследование возможности использования неочищенных Rhodococcus биосурфактантов для десорбции и мобилизации углеводородных соединений и солей тяжелых металлов (в частности Ni и V) в нефтешламах. Будет изучена возможность извлечения металлов из коллоидных растворов и порфириновых комплексов с помощью биосурфактантов. Также будет получены новые сведения об иммуномодулирующей активности очищенных препаратов трегалолипидного биосурфактанта из R. ruber ИЭГМ 231 в экспериментах in vitro и in vivo, которые откроют перспективы их биомедицинского применения. Планируется разработка специализированных управляемых бактериальных консорциумов из природных и генно-инженерных штаммов с высокой нефтеокисляющей активностью. Основу создаваемых консорциумов составят актинобактерии рода Rhodococcus, обозначенные в современной литературе как «мастера катаболитных реакций» вследствие чрезвычайно широкого спектра метаболизируемых субстратов и наличия уникальных ферментных систем. Перспективность использования родококков в нефтеокисляющих консорциумах определяется такими их свойствами как (1) способность усваивать широкий спектр углеводородов, (2) отсутствие катаболитной репрессии, вследствие чего они могут одновременно метаболизировать легко- и труднодеградируемые соединения, (3) высокая устойчивость к экстремальным факторам среды, в том числе низким температурам, повышенной кислотности и засоленности, (4) олигокарбо- и олигонитрофильные свойства, снимающие необходимость постоянного внесения минеральных удобрений, (5) склонность к адгезии и колонизации твердых поверхностей, способствующие их эффективной иммобилизации материалом адсорбента, и, наконец, (6) отсутствие патогенных свойств, определяющее безопасность их применения экобиотехнологии. На основе экологического моделирования с использованием разработанной нами программы будут получены новые данные по метаболической регуляции деградационной активности и стабильности микробных ассоциаций. Результаты оптимизации процесса очистки загрязненных углеводородами воды и почвы в лабораторных биореакторах разного принципа действия будут востребованы при разработке промышленных биоремедиационных технологий. В рамках внедренческой части проекта будет разрабатываться новый комплексный подход к переработки нефтесодержащих отходов, основанный на идее «обмена отходами – обмена ресурсами», когда отходы или побочные продукты сельскохозяйственного производства используются для утилизации отходов нефтяной промышленности. Основу разрабатываемого подхода составит комплексное использование непищевых отходов птицефабрик (птичий помет, подстилка, перо) для биологической утилизации нефтесодержащих отходов (твердых и жидких нефтешламов). Будут решаться проблемы безопасного использования отходов птицефабрик, в частности предотвращения загрязнения окружающей среды антибиотиками и другими лекарственными веществами с помощью деградационного потенциала родококков. Будет исследована кинетика процессов биодеструкции отдельных лекарственных препаратов (окситетрациклин, хлортетрациклин и амоксициллин) в условиях биореактора и компостирования.

 

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ

Аннотация результатов, полученных в 2021 году
В результате теоретических исследований обобщены данные литературы и собственные результаты по внедрению комплексного подхода к переработки нефтесодержащих отходов, основанного на идее «обмена отходами – обмена ресурсами», с учетом экологических рисков использования сельскохозяйственных отходов для биологической утилизации нефтесодержащих отходов. Обсуждены проблемы устойчивой биоремедиации нефтезагрязненных почв как примера промышленного симбиоза с управлением органическими отходами/органическими ресурсами. Получены результаты экспериментального исследования процесса биоконверсии высокотоксичных и труднодеградабельных компонентов нефти, в частности индена, подобранными наиболее активными культурами актинобактерий рода Rhodococcus в условиях их культивирования в темноте и на свету. Идентифицированные продукты биоокисления индена – 1-кето-2-гидроксииндан и 1-инданон по данным in silico анализа не обладают выраженной экотоксичностью и являются менее опасными для водных экосистем по сравнению с исходным соединением. Также установлено, что оба продукта являются потенциальными биологически активными веществами, в частности проявляющими антисеборейную, вазопротекторную, антагонистическую и др. активность. Получены новые данные об особенностях электротрансформации клеток R. ruber с использованием коммерческой транспозомы EZ-Tn5™ <KAN-2>Tnp (“Epicentre Technologies”, США). Выявлено появление спонтанно устойчивых к канамицину колоний R. ruber ИЭГМ 231 после электротрансформации, что затрудняет отбор полученных в результате электротрансформации клонов. При оптимизированных условиях получены Tn5-трансформанты контрольных клеток E. coli K12 с подтвержденной с помощью подобранных нами праймеров KAN R FP-1 и KAN-R RP 1 вставкой транспозона. Однако введение Tn5-транпозона не подтверждено в электротрансформированных клетках R. ruber, при этом предварительная обработка лизоцимом приводила к снижению их выживаемости после электропорации на 78,4 % по сравнению с клетками, обработанными по стандартному протоколу. С помощью комбинированной атомно-силовой и конфокальной лазерной микроскопии получены новые сведения о влиянии наночастиц оксида меди на формирующуюся биопленку родококков. Показано, что форма и размеры жизнеспособных клеток R. rhodochrous ИЭГМ 1363 и R. ruber ИЭГМ 231 в составе биопленки существенно изменялись, а шероховатость клеточной поверхности возрастала на 30-40% в присутствии НЧ CuO, что свидетельствует об адаптивных наноструктурных изменениях клеточной стенки бактерий под воздействием нанометалла. Показано, что клетки R. erythropolis ИЭГМ 766 при инкубировании с золотохлористоводородной кислотой формировали монодисперсные НЧ золота сферической формы размером 70±20 нм с электрокинетическим потенциалом 12 мВ, тогда как НЧ из R. ruber ИЭГМ 1135 были в полтора раза крупнее и имели отрицательный заряд (-20 мВ). Синтезируемые родококками НЧ золота оказывали антимикробное действие на грамположительные и грамотрицательные бактерии, что может быть востребовано в биомедицине. Установлено, что адсорбированные на опилках клетки R. rhodochrous ИЭГМ 1162 извлекали 44-53% ТМ из модельного раствора. При этом степень извлечения индивидуальных ТМ варьировала в восходящем ряду: Cu<Cd<Ni<Zn, что, по-видимому, определялось токсичностью ионов ТМ для клеток родококков. Получены результаты извлечения ТМ из реально загрязненной почвы, отобранной на территории промышленного предприятия (ОАО «Мотовилихинский завод», г. Пермь), с помощью Rhodococcus-биосурфактантов. После обработки загрязненной почвы биосурфактантом (С16), в ней практически не обнаруживались соли кадмия, хрома, никеля и свинца, а остаточное содержание меди, железа и цинка не превышало 2% от исходной концентрации. Полученные результаты свидетельствуют о перспективности биотехнологического способа извлечения металлов из твердофазных субстратов (загрязненной почвы, промышленных шламов и отвалов, бедных руд) и концентрированных растворов с использованием целых клеток родококков и синтезируемых ими нетоксичных экономически выгодных биосурфактантов. Результаты полевых испытаний по биоремедиации нефтезагрязненной почвы свидетельствуют об эффективности комплексного внесения иммобилизованного биопрепарата на основе активной ассоциации родококков и дополнительного источника органического азота в виде компоста на основе птичьего помета. По результатам исследования в 2021 г. заключены 3 договора о проведении промышленной обработки нефтесодержащих отходов на нескольких производственных участках для оценки возможности тиражирования разработанных методов биоремедиации.

 

Публикации

1. Баяндина Е.А., Глебов Г.Г., Куюкина М.С. Влияния наночастиц оксида меди на биопленки родококков Сб. статей Всероссийской научной конференции с международным участием «Фундаментальные и прикладные аспекты биоинформатики, биотехнологии и недропользования, С. 12-15 (год публикации - 2021) https://doi.org/10.17072/fpabbn-2021

2. Бузмаков С.А., Андреев Д.Н., Назаров А.В., Дзюба Е.А., Шестаков И.Е., Куюкина М.С., Елькин А.А., Егорова Д.О., Хотяновская Ю.В. Responses of various test objects to experimental soil contamination with crude oil Russian Journal of Ecology, V. 52, No. 4. P. 267–274. (год публикации - 2021) https://doi.org/10.1134/S1067413621040056

3. Варушкина А.М., Куюкина М.С., Криворучко А.В. Optimization of electrotransformation conditions for Rhodococcus cells using EZ-Tn5 ™ <KAN-2>  Tnp transposome Lecture Notes in Networks and Systems, Vol. 342. P. 421-426. (год публикации - 2022) https://doi.org/10.1007/978-3-030-89477-1_42

4. Каннингем К.Дж., Пешкур Т.А., Куюкина М.С., Ившина И.Б. Sustainable bioremediation of hydrocarbon contaminated soils: opportunities for symbiosis with organic waste management? Russian Journal of Ecology, V. 52, No. 6. P. 462–468 (год публикации - 2021) https://doi.org/10.1134/S1067413621060047

Аннотация результатов, полученных в 2022 году
Показана способность R. opacus ИЭГМ 488 к биотрансформации пентациклического тритерпеноида олеананового типа – 3β-гидроксиолеан-12-ен-28-овой кислоты. Полученное 3-оксипроизводное обладало менее выраженной острой и хронической токсичностью в отношении представителей водной фауны и флоры и с высокой степенью вероятности (0,822) может выступать в качестве агониста апоптоза, проявлять иммуномодулирующую (0,901), противоопухолевую (0,810), противовирусную (0,795), гепатопротекторную (0,735) и противовоспалительную (0,734) активность. Выполнено клонирование гена лакказы RHRU231v1_660030 из штамма-нефтедеструктора R. ruber ИЭГМ 231 в клетки E. coli. Оптимизированный протокол клонирования обеспечил стабильное поддержание содержащего лакказный ген вектора в потомстве трансформированной E. coli. Лакказная активность представителей экологически значимых видов родококков R. erythropolis и R. ruber экспериментально подтверждена в тесте на окисление специфического модельного субстрата 2,2`-азинобис(3-этилбензотиазолин сульфоновой кислоты (АБТС). Исследуемые лакказы сохраняли 51-100%- каталитическую активность в щелочных условиях (рН 8-11) среды, что свидетельствует о высокой рН стабильности лакказ родококков. Установлено, что биопленки R. ruber, выращенные в минеральной среде с 1,0 об. % н-гексадекана, более устойчивы к наночастицам (НЧ) оксида меди по сравнению с биопленками, растущими в полноценной питательной среде (МПБ). Это обусловлено более интенсивным формированием экзополимерного матрикса (ЭПМ), играющего основную роль в защите клеток от бактерицидного действия нанометалла. Изучена динамика и локализация основных компонентов ЭПМ биопленок при длительном (24-72 ч) культивировании с НЧ CuO. Выявлено повышенное содержание липидного компонента ЭПМ, увеличение относительного содержания полисахаридов и белков при воздействии высоких (0.01-0.1 г/л) концентраций НЧ CuO. Обобщен большой массив данных по влиянию наночастиц металлов Bi, Co, CuO, Fe2O3 и Ni на электрические свойства родококков (25 штаммов, принадлежащих к видам R. erythropolis, R. fascians, R. jostii, R. rhodochrous, R. ruber). На основе полученных экспериментальных данных выдвинута и статистически подтверждена гипотеза о том, что с увеличением концентрации НЧ металлов значения дзета-потенциала бактериальных клеток приближаются к дзета-потенциалу НЧ, свидетельствуя об их активной аккумуляции на поверхности клеток родококков. При этом более токсичные нанометаллы сильнее изменяли клеточный заряд бактерий, интенсивнее накапливаясь клеточной стенкой. Очевидно компоненты клеточной стенки или экзополимерного матрикса связывают накопленные металлические НЧ, тем самым предотвращая их проникновение через клеточную мембрану в цитоплазму. Полученные данные подтверждают важную роль ЭПМ в формировании резистентности родококков в составе биопленок к повреждающему действию нанометаллов. Получены новые данные о способности родококков к внутриклеточному восстановлению ионов никеля и ванадия – металлов, наиболее часто ассоциированных с нефтяными загрязнениями. Отобран штамм R. rhodochrous ИЭГМ 62Т, устойчивый к действию VOSO4 и способный к восстановлению ванадия, перспективный для извлечения данного металла из загрязненных субстратов. В результате биоинформационного поиска на основе секвенированных геномов родококков выявлен ген qcrC, кодирующий C субъединицу убихинол-цитохром С редуктазы, установлена его локализация и гомология. Продолжено изучение иммунорегулирующей активности моноацилтрегалозной фракции Rhodococcus-биосурфактанта в системе in vitro. Установлено, что введение мышам моноацилтрегалозы приводит к снижению уровня IL-2, IFN-γ и стимуляции продукции IL-4, что свидетельствует о смещении иммунного ответа с клеточного на гуморальный. Экспериментально обоснован пероральный способ администирования бактериального гликолипида, при котором выявлен наиболее выраженный иммуномодулирующий эффект, чего не отмечалось при двух других способах введения (внутрибрюшинном и внутримышечном). На основании анализа синергических взаимодействия актинобактерий с помощью программы экологического моделирования подобраны два бактериальных консорциума из штаммов родококков с высокой нефтеокисляющей и металл-аккумулирующей активностью: № 1 – R. erythropolis ИЭГМ 767, R. jostii ИЭГМ 1193, R. ruber ИЭГМ 230 и № 2 – R. cercidiphylli ИЭГМ 1184, R. opacus ИЭГМ 2226, R. rhodochrous ИЭГМ 1362. Данные консорциумы характеризовались наиболее высокими коэффициентами взаимодействия между штаммами (V_a=1,34 и V_a=1,45 соответственно). По данным высокоточной респирометрии, подобранные консорциумы родококков проявляли высокую дыхательную активность в присутствии модельной нефти и солей тяжелых металлов. Разработанные консорциумы на основе родококков могут использоваться при проведении работ по биоремедиации воды и почвы, загрязненных нефтяными углеводородами и солями тяжелых металлов.

 

Публикации

1. Баяндина Е.А., Глебов Г.Г., Куюкина М.С., Ившина И.Б. Resistance of Rhodococcus ruber biofilms to CuO nanoparticles depending on exopolymer matrix composition Acta Biomedica Scientifica, 7(5-1): 100-109 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.29413/ABS.2022-7.5-1.11

2. Гейн С.В., Южанинова Ю.Д., Куюкина М.С., Ившина И.Б. Effects of monoacyltrehalose biosurfactant from Rhodococcus ruber on the in vivo production of IL-2, IL-4, IFN-gamma, IL-17 Lecture Notes in Networks and Systems, - (год публикации - 2022)

3. Ившина И.Б., Криворучко А.В., Куюкина М.С., Пешкур Т.А., Каннингем К.Дж. Adhesion of Rhodococcus bacteria to solid hydrocarbons and enhanced biodegradation of these compounds Scientific Reports, - (год публикации - 2022)

4. Крашенинников А.Б., Гаврило М.В., Елькин А.А., Моисеев Д.С., Кайгородов Р.В., Торопов Л.И. Features of freshwater ecosystems of the Franz Josef Land archipelago Polar Science, 33,100849 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.1016/j.polar.2022.100849

5. Куюкина М.С., Глебов Г.Г., Ившина И.Б. Effects of nickel nanoparticles on Rhodococcus cell surface morphology and nanomechanical properties Nanomaterials, 12(6), 951 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.3390/nano12060951

6. Куюкина М.С., Макарова М.В., Ившина И.Б., Казымов К.П., Осовецкий Б.М. Biosynthesis and characterization of gold nanoparticles produced using Rhodococcus actinobacteria at elevated chloroauric acid concentrations International Journal of Molecular Sciences, 23, 12939 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.3390/ijms232112939

7. Куюкина М.С., Макарова М.В., Писцова О.Н., Глебов Г.Г., Осипенко М.А., Ившина И.Б. Exposure to metal nanoparticles changes zeta potentials of Rhodococcus cells Heliyon, 8, e11632 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.1016/j.heliyon.2022.e11632

8. Лучникова Н.А., Гришко В.В., Кострикина Н.А., Сорокин В.В., Мулюкин А.Л., Ившина И.Б. Biotransformation of oleanolic acid using Rhodococcus rhodochrous IEGM 757 Catalysts, 12, 1352 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.3390/catal12111352

9. Лучникова Н.А., Мальцева П.Ю., Гришко В.В., Ившина И.Б. Features of the bioconversion of pentacyclic triterpenoid oleanolic acid using Rhodococcus actinobacteria KnE Life Sciences, 2022, 304–318 (год публикации - 2022) https://doi.org/10.18502/kls.v7i1.10138

Возможность практического использования результатов
Полученные результаты будут востребованы при создании промышленных технологий переработки нефтесодержащих отходов и биоремедиации экосистем, загрязненных углеводородами и солями тяжелых металлов. Реализация результатов проекта будет способствовать снижению экологического напряжения вследствие уменьшения объема накапливаемых отходов.