Аннотация результатов, полученных в 2020 году
В исследование было включено 67 больных с морфологически верифицированным диагнозом инвазивной карциномы молочной железы неспецифического типа (ИКНТ, средний возраст составил 52,7±9,3 лет), проходивших лечение на базе НИИ онкологии Томского НИМЦ с эстроген-позитивным (люминальными А и В-1, -2) и трижды негативным подтипами (T1-3N0-3M0). Сформирована выборка пациентов, проходящих иммунотерапию ингибиторами иммунных контрольных точек на базе отделения химиотерапии НИИ онкологии Томского НИМЦ. В настоящее время терапия атезолизумабом (ингибитором иммунных контрольных точек) на основании показаний проводится четырем пациентам (возраст от 41 до 65 лет, метастатический трижды негативный рак молочной железы). У PD-L1-положительных пациентов в первичной опухоли доля дифференцированных Th2-лимфоцитов, экспрессирующих PD-1 (т.е. ингибированных опухолью) выше, а доля дифференцированных Th1-лимфоцитов, экспрессирующих PD-1 – ниже, чем у пациентов с негативным статусом PD-L1. Адаптивные Т-хелперные лимфоциты 1 типа в строме больных ИКНТ экспрессируют TNFalpha в 42,8% случаев, не зависимо от наличия или отсутствия экспрессии PD-1. Частота встречаемости IL-10-положительных Т-хелперных лимфоцитов 2 типа в строме у больных ИКНТ составляет 70,4%. При этом, Th2-лимфоциты, экспрессирующие IL-10, преимущественно не экспрессируют на своей поверхности PD-1, что свидетельствует об отсутствии возможности регулировать активность данных клеток посредством препаратов, ингибирующих иммунные контрольные точки. Полученные результаты доложены на международных конференциях: ESMO Molecular Analysis for Precision Oncology (MAP) Virtual Congress 2020. 08-10 October 2020. ESMO Asia Virtual Congress 2020. 20-22 November 2020. Результаты опубликованы в журнале: Annals of Oncology, Q1 Освещение результатов в средствах массовой информации: http://www.sib-science.info/ru/institutes/izuchenie-mikrookruzheniya-zlokachestvennoy-10082020 http://www.ipgg.sbras.ru/ru/news/izuchenie-mikrookruzheniya-zlokachestvennoy-10082020

Аннотация результатов, полученных в 2021 году
Изучалась сопряженность экспрессии PD-L1 опухолевыми клетками с проявлением ими признаков стволовости (по экспрессии маркеров CD44+CD24-) и эпителиально-мезенхимального перехода (по экспрессии маркера N-cadherin). Потенциями к блокированию иммунного ответа через PD-L1/PD1 сигнальный путь обладают преимущественно опухолевые клетки со свойствами стволовости, которые могут сочетаться с проявлениями ЭМП. Доля таких клеток среди PD-L1-позитивных опухолевых клеток была наибольшей, по сравнению с опухолевыми клетками, не имеющими признаков стволовости. С помощью мультиплексной семицветной иммунофлуоресценции было оценено разнообразие макрофагов в PD-L1-негативных и PD-L1-позитивных опухолях, а также экспрессия ими PD-L1/PD1. Было показано, что применение ингибиторов иммунных контрольных точек у пациентов, отличающихся большей долей PD1+/-PD-L1+ М1 макрофагов потенциально может быть более эффективным, как за счет их активации, так и за счет стимуляции перепрограммирования PD1-PD-L1- М2 макрофагов. Впервые в России проведено секвенирование ткани рака молочной железы in situ с помощью технологии 10x Genomics. Пространственный транскрипционный анализ позволил соотнести экспрессионные профили клеток с их морфологией, в том числе изолированно оценить профили экспрессии и сигнатуры клеточных элементов в локусах опухоли с сочетанием экспрессии PD-L1 и PD1 или моноэкспрессией каждого гена. Помимо этого, реализованный подход позволил впервые в мире определить экспрессионные сигнатуры клеток в PD-L1-негативных и PD-L1-позитивных опухолях и сравнить их, соотнеся с типом клеток. Совокупность результатов, полученных на первом этапе выполнения проекта, и результаты текущего этапа были обобщены и проанализированы для определения типов иммуновоспалительных реакций, протекающих в микроокружении опухоли с различным статусом экспрессии PD-L1. На основании полученных результатов можно выделить три группы иммуновоспалительных реакций в опухоли: преобладающую смешанную, когда в пределах одного образца встречаются проявления и Th1- и Th2-иммунного ответа; только врожденный иммунный ответ; и минорные варианты изолированных Th1- и Th2-подобных иммуновоспалительных реакций. Наиболее значимым является наблюдение о том, что как у пациентов с негативным статусом PD-L1, так и позитивным, в опухоли обнаруживаются проявления проопухолевых иммуновоспалительных реакций, которые промотируют опухолевый рост и прогрессию. Результаты исследования показывают преобладание зрелых коммитированных В-лимфоцитов и В-лимфоцитов памяти, способных к синтезу иммуноглобулинов разных классов и цитокинов, относящихся к спектру ИВР Th2 типа в микроокружении PD-L1-позитивных опухолей. Это может являться неблагоприятным признаком при планировании иммунотерапии анти-PD-L1 ингибиторами, поскольку с высокой вероятностью ее применение может активировать клетки микроокружения с проопухолевыми потенциями, что в конечном итоге будет способствовать прогрессии карцином. Таким образом, целесообразно для поиска маркеров эффективности иммунотерапии определять следующие параметры в опухоли у двух когорт больных (с хорошим и плохим ответом на иммунотерапию): 1. Субпопуляции М1 и М2 макрофагов с экспрессией PD-L1 и PD1 или их отсутствием. 2. Субпопуляции В-лимфоцитов с определением степени зрелости. 3. Цитокиновый профиль опухоли.

Аннотация результатов, полученных в 2022 году
В одноцентровое нерандомизированное двухкогортное исследование вошли 8 пациентов с диагнозом метастатический тройной негативный рак молочной железы (возраст от 42 до 65 лет), получающих химиоиммунотерапию по схеме наб-паклитаксел + атезолизумаб каждые 4 нед. на базе отделения химиотерапии НИИ онкологии Томского НИМЦ в период с 2020 по 2022 год. Оценка эффекта терапии осуществлялась каждый месяц с момента ее начала посредством критериев RECIST v1.1. Образцы опухоли пациентов были проанализированы с помощью семицветного иммунофлуоресцентного исследования и определены цитотоксические лимфоциты (CD8+), В-лимфоциты (CD20+), Т-регуляторные лимфоциты (FoxP3+), М2 макрофаги (CD163+). В каждой иммунной клетке была оценена экспрессия белков PD-L1 и PD-1. Данные параметры были испытаны в качестве предикторов длительного ответа на химиоиммунотерапию. В результате выполнения заключительного этапа проекта разработан алгоритм персонифицированного предсказания эффективности терапии ингибиторами иммунных контрольных точек на основании оценки в первичной опухоли количества CD163+ клеток. В основе алгоритма лежит определение вероятности эффективности противоопухолевого лечения ИИКТ с помощью оценки в первичной опухоли количества CD163+ клеток. При обнаружении CD163+ клеток в количестве меньшем 8,08% можно говорить о высокой вероятности длительного ответа на терапию ИИКТ; при отсутствии – о низкой вероятности. Для оценки количества CD163+ клеток необходимо проведение иммуногистохимического исследования образца первичной опухоли с использованием антител anti-CD163. Данный алгоритм предназначен для клинической лабораторной диагностики, врачей-онкологов и химиотерапевтов и может служить фактором выбора схемы химиотерапии для больных метастатическим тройным негативным раком молочной железы. Результаты выполнения проекта были освещены в СМИ: https://rscf.ru/news/media/tomskie-uchenye-vpervye-v-rossii-proveli-analiz-kletok-raka-molochnoy-zhelezy-s-pomoshchyu-metoda-pr/ https://www.tnimc.ru/novosti/nii-onkologii/tomskie-uchenye-vpervye-v-rossii-proveli-analiz-kletok-raka-molochnoy-zhelezy-s-pomoshchyu-metoda-pr/