КАРТОЧКА ПРОЕКТА ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ И ПОИСКОВЫХ НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ,
ПОДДЕРЖАННОГО РОССИЙСКИМ НАУЧНЫМ ФОНДОМ

Информация подготовлена на основании данных из Информационно-аналитической системы РНФ, содержательная часть представлена в авторской редакции. Все права принадлежат авторам, использование или перепечатка материалов допустима только с предварительного согласия авторов.

 

ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ


Номер 18-74-10008

НазваниеСистемный анализ генов, обеспечивающих устойчивость корня растений к низким положительным температурам

РуководительМиронова Виктория Владимировна, Кандидат биологических наук

Организация финансирования, регион Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук", Новосибирская обл

Период выполнения при поддержке РНФ 07.2018 - 06.2021 

Конкурс№30 - Конкурс 2018 года по мероприятию «Проведение исследований научными группами под руководством молодых ученых» Президентской программы исследовательских проектов, реализуемых ведущими учеными, в том числе молодыми учеными.

Область знания, основной код классификатора 04 - Биология и науки о жизни, 04-201 - Структурная, функциональная и эволюционная геномика

Ключевые словахолодоустойчивость, холодочувствительность, холодовой стресс, биоинформатика, математическое моделирование, ПГАА, фитогормоны, морфогенез, ниша стволовых клеток

Код ГРНТИ34.03.23


СтатусУспешно завершен


 

ИНФОРМАЦИЯ ИЗ ЗАЯВКИ


Аннотация
Холодоустойчивость растений – это способность переносить низкие положительные температуры с последующим возобновлением роста и репродукции в благоприятных условиях. В ответ на воздействие холода меняется экспрессия большого числа генов и выявление ключевых генов-регуляторов устойчивости растений к холоду является актуальной задачей. В рамках данного проекта будет проводиться поиск и системный анализ генов, обеспечивающих холодоустойчивость и холодочувствительность, в рамках прямой (от фенотипа к генотипу) и обратной (от генотипа к фенотипу) задач генетики. Прямая задача: Ранее в сотрудничестве с исследователями из Университета Сингапура мы описали реакцию ниши стволовых клеток корня Arabidopsis thaliana на понижение температуры – гибель дочерних клеток инициалей корневого чехлика – вероятность возникновения этой реакции ассоциирована с холодоустойчивостью растения в целом (Hong et al., Cell, 2017). В рамках данного проекта мы проведем полногеномный анализ ассоциаций (ПГАА) между этим фенотипическим признаком и полиморфизмами генов в экотипах A. thaliana (экспериментальные данные предоставлены соавторами из Сингапурак). Параллельно с этим мы исследуем реакцию ниши стволовых клеток корня холодочувствительных и холодоустойчивых сортов Triticum aestivum. Обратная задача: Будет проведен системный анализ полногеномных экспериментов по исследованию индуцированных холодом изменений транскриптомов, ДНК-белковых взаимодействий с известными регуляторами холодового стресса и других экспериментов функциональной геномики. Мета-анализ этих данных позволит реконструировать генную сеть ответа растения на холод, выделить в ней функциональные модули, обратные связи, интегрировать ее с результатами ПГАА. Выявленные с помощью ПГАА гены будут проанализированы методами биоинформатики, эволюционной и функциональной геномики. Предсказания биоинформатического анализа будут проверены экспериментально нами или в сотрудничестве с исследователями из Сингапура. Мы проведем секвенирование транскриптомов проростков нескольких холодочувствительных и холодоустойчивых сортов пшеницы в норме и на холоде. Данные по полиморфизмам генов между сортами с контрастной реакцией на холод будут сравнены с данными ПГАА у арабидопсиса.

Ожидаемые результаты
Проблема холодоустойчивости растений всегда будет актуальна в России в связи с особенностями нашего климата. Устойчивость растения к низким положительным температурам часто связана с усилением морозо-, засухо- и соле-устойчивости. В результате выполнения проекта будут выявлены ключевые гены холодоустойчивости и холодочувствительности у модельного растения A. thaliana. Будет реконструирована генная сеть ответа на холод у этого растения, в ней будут выделены функциональные модули, найдены обратные связи, консервативные гены и гены, находящиеся под движущим отбором. Будет найдено и описано множество транскрипционных факторов, обеспечивающих ответ растения на холод, предсказаны их ко-регуляторы и мишени, некоторые предсказания будут проверены экспериментально. Кроме того, будут описаны сходства и различия в генах ответа на холод в корнях между арабидопсисом и пшеницей на молекулярном и фенотипическом уровнях. Во-первых, мы узнаем, является ли гибель дочерних клеток корневого чехлика корня в ответ на холод маркером устойчивости к холоду у пшеницы, также, как у арабидопсиса (Hong et al., Cell, 2017). Во-вторых, анализ индуцированных холодом экзомов разных сортов пшеницы совместно с референсной генной сетью, полученной на арабидопсисе, позволит выявить кандидатные гены, ответственные за холодоустойчивость и холодочувствительность у пшеницы. Эта информация может быть использована в дальнейшем для маркер-направленной селекции сельскохозяйственных растений.


 

ОТЧЁТНЫЕ МАТЕРИАЛЫ


Аннотация результатов, полученных в 2018 году
Проведен сиcтемный анализ индуцированных холодом транскриптомов Arabidopsis thaliana. Всего проанализировано 40 наборов данных, различающихся по тканям, стадии развития, температуре, экотипу; 31 эксперимент прошел контроль качества и взят для мета-анализа. В результате мета-анализа выявлено, что две трети генов арабидопсиса так или иначе меняют свою экспрессию в ответ на холод в определенных условиях. Выявлена коровая генная сеть – гены, чья экспрессия меняется в ответ на холод систематически. 30 генов из этой генной сети меняют свою экспрессию в 25 из 31 экспериментов. Значительная часть этой генной сети ассоциирована с ответом на ауксин. Результаты анализа позволили сформулировать гипотезы, которые будут проверены экспериментально. В результате мета-анализа полногеномных данных также было найдено 18 транскрипционных факторов, ассоциированных с ответом на холод. Среди них, CBF2-4 и CAMTA1 являются известными регуляторами ответа на холодовой стресс, связь других транскрипционных факторов с холодом ранее не была изучена, хотя возможная роль некоторых из них при холодовом стрессе была предсказана. Обработка низкими концентрациями экзогенного ауксина и относительно низкими концентрациями экзогенной салициловой кислоты подавляют гибель дочерних клеток инициалей корневого чехлика, признака найденного ранее как маркер ответа на холод в корне растений. Обнаружен концентрационно-зависимый механизм действия салициловой кислоты на развитие меристемы корня Arabidopsis thaliana. Салициловая кислота (CK) – это фитогормон, для которого хорошо известно, что он индуцирует белки, связанные с патогенезом (PR белки) и системную приобретенную устойчивость (SAR); СК также оказывает специфическое влияние на рост и развитие растений. Мы проанализировали влияние СК на развитие корня Arabidopsis thaliana. Оказалось, что обработка экзогенной СК при низких (ниже 50 мкМ) и высоких (более 50 мкМ) концентрациях по-разному влияет на развитие корневой меристемы, но при этом в обоих случаях не зависимо от PR1 белка. Низкие концентрации СК способствовали развитию придаточных корней и меняли строение апикальной меристемы корня, тогда как высокие концентрации СК подавляли все процессы роста в корне. При любой концентрации обработка СК приводила к изменениям в синтезе и транспорте ауксина. Широкий диапазон концентраций СК активировал синтез ауксина, но влияние СК на транспорт ауксина определялось ее концентрацией. При низких концентрациях СК прриводит к накоплению ауксина в кончике корня, а при высоких, наоборот, к его дефициту. Индуцированное низкими концентрациями СК накопление ауксина приводило к образованию большего количества инициалей колумеллы, дополнительного слоя клеток кортекса (срединный кортекс) и дополнительных файлов клеток эпидермиса, кортекса и эндодермы. Подавление гена SHORT ROOT и активация гена CYCLIN D6; 1 опосредовали изменения в радиальной архитектуре корня. Мы предполагаем, что низкие концентрации СК играют важную роль в формировании структуры корневой меристемы и архитектуры корневой системы (Pasternak et al., 2019).

 

Публикации

1. Пастернак Т., Грут Е.П., Казанцев Ф.В., Тиль В., Омельянчук Н.А., Коврижных В.В., Пальме К., Миронова В.В. Salicylic acid affects root meristem patterning via auxin distribution in a concentration-dependent manner Plant Physiology, Volume: 180 Issue: 3 Pages: 1725-1739 (https://doi.org/10.1104/pp.19.00130) (год публикации - 2019) https://doi.org/10.1104/pp.19.00130


Аннотация результатов, полученных в 2019 году
1. Завершён мета-анализ всех опубликованных на данный момент полногеномных данных по исследованию транскрипционного ответа Arabidopsis thaliana на низкие положительные температуры (Sizentsova et al., 2019).. В результате найдено более 15 кандидатные генов-регуляторов ответов растения на холод. 2. Мета-анализ транскриптомных данных показал, что холодовой стресс динамично меняет гормональный статус в тканях. На ранней стадии холодовой реакции изменения в метаболизме происходят для всех исследуемых гормонов, кроме SA, которая реагирует на холод позже путем тонкой настройки биосинтеза (Omelyanchuk et al., accepted).. 3. Показано, что не только CBF1, CBF2 и CBF3 ТФ, но и множество других ТФ из семейства AP2/ERF устойчиво меняют свою экспрессию в ответ на холод. В отличие от CBF1-3, у остальных AP2/ERF эта реакция оказалась специфичной определенной фазе транскрипционного ответа. 4. Проведен мета-анализ промоторных областей дифференциально-экспрессирующихся в ответ на холод генов (Novikova et al., preprint). В результате описано разнообразие цис-регуляторных элементов ассоциированных с ответом на холод. Среди них как сайты связывания известных регуляторов ответа на холод, так и потенциальные сайты связывания перспективных кандидатов в регуляторы. 5. Показана ингибирующая роль экзогенных СК и ауксина на развитие главного и боковых корней арабидопсиса в норме и в ответ на холод. 6. Показано, что транскрипционный фактор WOX5 регулирует биосинтез ауксина в покоящемся центре через регуляцию экспрессии фермента TAA1. 7. Создана серия математических моделей для исследования распределения ауксина после повреждения ниши стволовых клеток в меристеме корня.

 

Публикации

1. Омельянчук Н.А., Сизенцова Я.Г., Миронова В.В. Meta-analysis of transcriptome data clarified hormonal regulation of cold stress response in Arabidopsis thaliana L Proceedings of 11th Multiconference BGRS/SB-2020, Novosibirsk, - (год публикации - 2020)

2. Савина М.С., Миронова В.В. Моделирование распределения ауксина при регенерации меристемы корня Arabidopsis thaliana VII Съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров, посвященный 100-летию кафедры генетики СПбГУ, и ассоциированные симпозиумы Сборник тезисов Международного Конгресса., С. 133. (год публикации - 2019)

3. Сизенцова Я.Г., Омельянчук Н.А., Омельянчук Н.А. SYSTEMS ANALYSIS OF CHILLING STRESS INDUCED TRANSCRIPTOMES IN ARABIDOPSIS THALIANA PLANT GENETICS, GENOMICS, BIOINFORMATICS, AND BIOTECHNOLOGY (PLANTGEN2019) Abstracts. Eds. A.V. Kochetov, E.A. Salina; Institute of Cytology and Genetics, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences;. 2019, стр. 194 (год публикации - 2019) https://doi.org/10.18699/PlantGen2019-176

4. Д.Д. Новикова, П.А. Черенков, Я.Г. Сизенцова, В.В. Миронова metaRE R package for meta-analysis of transcriptome data to identify the cis-regulatory code behind the transcriptional reprogramming Preprints, - (год публикации - 2020)

5. - Новосибирская студентка освоила передовые методы генной инженерии на стажировке в чешском университете Новости сибирской науки, - (год публикации - )


Аннотация результатов, полученных в 2020 году
- Завершен систематический анализ транcкрипционного ответа на холодовой стресс у Arabidopsis thaliana. Найдены гены, ассоциация с холодом которых ранее была неизвестна. - Дан обзор реакции ниши стволовых клеток корня растения на абиотические факторы (Ubogoeva et al., JXB, minor revision) - Показана роль WOX5 ТФ в регуляции поддержания ниши стволовых клеток в корне: он активирует TAA1-зависимый биосинтез ауксина (Savina et al., Frontiers in Plant Sciences, 2020) - Найдены цис-регуляторные элементы, ассоциированные с ответом на холод у растений и животных (Novikova et al., Genes, 2020)

 

Публикации

1. Балкан Канер, Джефри Хейман, Мария Савина, Аяй Девендран, Томас Экхут, Илсе Веркотерен,Элс Принсен, Ротем Матосевич, Чен Ксу, Виктория Миронова, Ливен Де Вейлдер Rocks in the auxin stream: Wound induced auxin accumulation and ERF115 expression synergistically drive stem cell regeneration PNAS, V. 117. N: 28. P. 16667-16677. (год публикации - 2020) https://doi.org/10.1073/pnas.2006620117

2. Мария Савина, Тарас Пастернак, Надежда Омельянчук, Дарья Новикова, Клаус Пальме, Виктория Миронова, Виктория Лавреха Cell dynamics in WOX5-overexpressing root tips: the impact of local auxin biosynthesis. Frontiers in Plant Science, V. 11. P.1529. (год публикации - 2020) https://doi.org/10.3389/fpls.2020.560169

3. Новикова Д.Д., Черенков П.А., Сизенцова Я.Г., Миронова В.В. metaRE R Package for Meta-Analysis of Transcriptome Data to Identify the cis-Regulatory Code behind the Transcriptional Reprogramming Genes, 11(6), 634 (год публикации - 2020) https://doi.org/10.3390/genes11060634

4. Надежда Омельянчук, Яна Сизенцова, Виктория Миронова Meta-analysis of transcriptome data clarified hormonal regulation of cold stress response in Arabidopsis thaliana L BIOINFORMATICS OF GENOME REGULATION AND STRUCTURE/SYSTEMS BIOLOGY (BGRS/SB-2020), P. 332-331 (год публикации - 2020) https://doi.org/10.18699/BGRS/SB-2020-210

5. - Спасти урожай: ученые изучили механизм регенерации растений Поиск, и ряд других сходных публикаций по этой теме... в том числе на сайте РНФ (год публикации - )


Возможность практического использования результатов
Некоторые результаты, полученные в рамках проекта имеют прикладное значение. Обнаружены протекторные механизмы в ответ на холодовой стресс при экзогенных обработках растений салициловой кислотой, ауксином и солями железа (все в низких концентрациях!).