Аннотация результатов, полученных в 2015 году
Целью данного этапа исследований было изучение численности различных субпопуляций CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов и анализ зависимости количества Т-клеток разной степени зрелости от уровня провоспалительных цитокинов при ВИЧ/ВГС коинфекции. Основную исследуемую группу составили 42 пациента с сочетанной ВИЧ/ВГС инфекцией. Две контрольные группы были представлены 37 ВИЧ-моноинфицированными больными и 20 относительно здоровыми донорами без признаков ВИЧ или ВГС инфекций. Все ВИЧ-инфицированные субъекты находились на антиретровирусной терапии не менее двух лет. Вирусная нагрузка ВИЧ в их крови была полностью подавлена (<50 копий в мл крови). План работы был одобрен этическим комитетом. Каждый участник предоставил подписанную форму информированного согласия. В крови пациентов определяли количество CD4+ и CD8+ T-лимфоцитов, число тромбоцитов, уровни вирусной нагрузки ВИЧ и ВГС, активность аспартат аминотрансферазы (АСТ) и аланин аминотрансферазы (АЛТ). Рассчитывали АСТ/тромбоцитарный индекс (APRI). В плазме крови устанавливали концентрации некоторых маркеров системного воспаления: интерлейкин-6 (IL-6), растворимый CD14 (sCD14), растворимый CD163 (sCD163), свободный рецептор II к фактору некроза опухоли-альфа (sTNF-RII), интерферон-гамма индуцированный протеин 10 (IP-10), кишечный протеин, связывающий жирные кислоты (I-FABP), неоптерин, D-димеры и бактериальный липополисахарид (ЛПС). Мононуклеары крови получали путем центрифугирования в градиенте плотности стандартным методом. Выделенные клетки окрашивали с использованием моноклональных антител и анализировали на проточном цитофлуориметре. Определяли относительные и абсолютные количества CD4+ и CD8+ тимических мигрантов, наивных Т-лимфоцитов, клеток центральной и эффекторной памяти, а также терминальных эффекторов. Анализировали уровень активации периферических Т-лимфоцитов. При анализе данных рассчитывали медиану и интерквартильный размах. Сравнение между показателями проводили с использованием критерия Манна-Уитни. Оценку связей выполняли путем корреляционного анализа (R – коэффициент ранговой корреляции Спирмена). В результате проведенных исследований нами было впервые установлено, что: - у ВИЧ/ВГС-коинфицированных пациентов интенсивность системного воспаления значительно выше, чем у больных с ВИЧ моноинфекцией; - если при ВИЧ моноинфекции основным фактором системного воспаления является повреждение кишечника и выход бактериальных продуктов в кровь, то при ВИЧ/ВГС коинфекции существуют дополнительные факторы, усиливающие системное воспаление; - факторами, усиливающими процесс системного воспаления при ВИЧ/ВГС коинфекции, являются: 1) нарушение печеночного барьера; 2) цитолиз гепатоцитов; 3) усиление активации макрофагов под действием вируса гепатита С (механизм неизвестен); - у ВИЧ/ВГС-коинфицированных больных дефицит наивных CD4+ Т-лимфоцитов является основой неэффективного восстановления иммунной системы на фоне подавленной под влиянием антиретровирусной терапии вирусной нагрузки ВИЧ; - нарушение восстановления численности CD4+ Т-клеток при ВИЧ/ВГС коинфекции ведет к усилению разрушения печени и развитию цирроза.

Аннотация результатов, полученных в 2016 году
На предыдущем этапе исследования нами было установлено, что коинфицирование вирусом гепатита C (ВГС) у ВИЧ-позитивных больных сопровождается более выраженным по сравнению с ВИЧ моноинфекцией развитием системного воспаления. У ВИЧ/ВГС коинфицированных больных также было обнаружено усиление деструктивных процессов в печени и повышение вероятности развития фиброза и цирроза при нарушении восстановления CD4+ T-лимфоцитов в ответ на терапию. Кроме того, коинфекция вызывала более значительное снижение в крови количества наивных CD4+ Т-клеток и повышение числа CD8+ Т-лимфоцитов центральной памяти. Исходя из того факта, что 98% лимфоцитов в организме человека находится в лимфоидных органах [Trepel, 1974], на втором этапе исследования необходимо было подтвердить наличие выявленных закономерностей для клеток лимфатических узлов. Кроме того, оценка системного воспаления была нами проведена только на основе определения уровней провоспалительных цитокинов и метаболитов. Концентрации противовоспалительных цитокинов не были установлены. В процессе работы также стало очевидным, что мы не можем игнорировать вероятную роль иммунных комплексов в развитии системного воспаления при ВИЧ/ВГС коинфекции, так как оба заболевания характеризуются выраженным развитием гуморального иммунного ответа на вирусные антигены. Целью второго этапа исследований стала дополнительная оценка механизмов развития системного воспаления при коинфекции и сравнение у пациентов с ВИЧ/ВГС коинфекцией распределения субпопуляций CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов разной степени зрелости в лимфатических узлах и крови. Основную исследуемую группу составили 42 пациента с сочетанной ВИЧ/ВГС инфекцией. Две контрольные группы были представлены 37 ВИЧ-моноинфицированными больными и 20 относительно здоровыми донорами без признаков ВИЧ или ВГС инфекции. У 12 ВИЧ-инфицированных больных были взяты лимфатические узлы. Все ВИЧ-инфицированные субъекты находились на антиретровирусной терапии не менее двух лет. Вирусная нагрузка ВИЧ в их крови была полностью подавлена (<50 копий в мл крови). План работы был одобрен этическим комитетом. От всех участников исследования было получено информированное согласие. В крови у них определяли уровни вирусной нагрузки ВИЧ и ВГС, активность аспартат аминотрансферазы (АСТ) и аланин аминотрансферазы (АЛТ), число тромбоцитов, концентрации TGF-β1, TGF-β2, TGF-β3 и IL-10. Паховые лимфатические узлы забирали под местной анестезией гомогенизировали в присутствии коллагеназ. Мононуклеары, полученные из крови и гомогенатов лимфатических узлов, метили моноклональными антителами и анализировали на проточном цитофлуориметре. Определяли содержание CD4+ и CD8+ тимических мигрантов, наивных Т-лимфоцитов, стволовых клеток памяти, клеток центральной и эффекторной памяти, а также терминальных эффекторов. Анализировали уровень активации периферических Т-лимфоцитов. Выделение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) проводили при 3% и 4% концентрациях полиэтиленгликоля-6000, а затем устанавливали содержание IgG, IgM и IgA в составе ЦИК. При анализе данных рассчитывали медиану и интерквартильный размах. Сравнение между показателями проводили с использованием критерия Манна-Уитни. Оценку связей выполняли путем корреляционного анализа (R – коэффициент ранговой корреляции Спирмена). В результате проведенных исследований нами было впервые установлено, что: ˗ выявленный на клетках крови дефицит наивных CD4+ T-лимфоцитов у ВИЧ/ВГС-коинфицированных пациентов является реальным отражением неблагоприятной ситуации в лимфоидных органах; ˗ недостаточность наивных CD4+ T-клеток при ВИЧ/ВГС-коинфекции существенно глубже, чем при ВИЧ моноинфекции; их утрата путем апоптоза мало вероятна по причине активной продукции этими клетками антиапоптотического фактора Bcl-2; ˗ у пациентов с ВИЧ/ВГС-коинфекцией и ВИЧ-моноинфекцией пролиферативная активность наивных CD4+ T-лимфоцитов в лимфатических узлах находится на одном уровне; ˗ в лимфатических узлах ВИЧ-инфицированных субъектов значительно острее, чем в крови проявляется нарушение экспрессии на T-клетках рецептора к IL-7; доля тимических мигрантов среди наивных CD4+ T-лимфоцитов в них в 2,5 раза ниже, чем в крови; ˗ интенсивность системного воспаления у ВИЧ/ВГС коинфицированных пациентов значительно выше, чем у больных с ВИЧ моноинфекцией, а активность провоспалительных агентов не компенсируется выбросом противовоспалительных цитокинов; ˗ иммунные комплексы, присутствующие в кровотоке больных, могут вносить дополнительный вклад в активацию иммунитета у коинфицированных больных.

Аннотация результатов, полученных в 2017 году
У пациентов коинфицированных ВИЧ и вирусом гепатита С (ВГС) чаще развивается дискордантный ответ на антиретровирусную терапию (АРТ), при котором не происходит значительного прироста числа CD4+ Т-клеток на фоне вирусологически эффективного лечения. Ранее мы показали, что такие больные характеризуются усилением деструктивных процессов в печени, повышением вероятности развития фиброза и цирроза, а также выраженным системным воспалением. Целью заключительного этапа проекта была оценка механизмов развития системного воспаления у ВИЧ/ВГС коинфицированных больных с дискордантным ответом на лечение. Всего было обследовано 79 ВИЧ-инфицированных пациентов, разделенных на четыре группы в зависимости от эффективности прироста числа CD4+ Т-клеток на фоне АРТ и наличия или отсутствия ВГС коинфекции. У части ВИЧ-инфицированных больных (по три человека из каждой группы) под местной анестезией были взяты паховые лимфатические узлы. Все ВИЧ-инфицированные субъекты находились на антиретровирусной терапии не менее двух лет. Вирусная нагрузка ВИЧ в их крови была подавлена (<50 копий в мл крови). План работы был одобрен этическим комитетом. От всех участников исследования было получено письменное информированное согласие. Мононуклеары, выделенные из периферической крови и гомогенатов лимфатических узлов, метили моноклональными антителами и анализировали на проточном цитофлюориметре. Определяли субпопуляционный состав CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов и их функциональное состояние (пролиферация, активация, истощение). В гистологических препаратах лимфоузлов оценивали степень фиброзирования ткани, пролиферацию и численность клеточных элементов. Исследование роли иммунных комплексов в активации Т-клеток проводили с использованием модельных систем, содержащих антигены ВИЧ или ВГС. При анализе данных рассчитывали медиану и интерквартильный размах. Сравнение между показателями проводили с использованием критерия Манна-Уитни или критерия знаков. В результате проведенных исследований нами впервые установлено, что: 1) при дискордантном ответе на АРТ у ВИЧ/ВГС коинфицированных и ВИЧ моноинфицированных больных происходят однонаправленные изменения субпопуляционного состава Т-лимфоцитов; 2) из двух заболеваний, вызываемых ВИЧ и ВГС, ведущая роль в нарушении структуры лимфатических узлов принадлежит ВИЧ-инфекции; 3) в лимфатических узлах ВИЧ-позитивных больных с дискордантным ответом на АРТ увеличена доля PAR-1+ Т-клеток, что может вносить вклад в развитие локального воспаления; 4) у ВИЧ-зараженных больных с неэффективным ответом на лечение коинфицирование гепатитом С приводит к изменению функционального состояния Т-лимфоцитов, а именно: a. увеличению относительного количества хелперных и цитотоксических CD95+Bcl-2+ Т-клеток центральной памяти в лимфатических узлах, что, вероятно, отражает состояние их активации; b. повышению доли пролиферирующих CD4+ Т-лимфоцитов, главным образом, за счет клеток центральной памяти; c. развитию глубокого истощения CD4+ и CD8+ Т-клеток памяти; 5) в условиях in vitro иммунные комплексы, содержащие антигены ВИЧ, способны стимулировать Т-лимфоциты. Это может вносить дополнительный вклад в активацию иммунокомпетентных клеток и развитие системного воспаления при ВИЧ-инфекции.